Perpustakaan Digital ITB

Virus hepatitis B (VHB) menjadi penyebab 96% kematian karena infeksi virus hepatitis di dunia. Infeksi VHB berkembang dari hepatitis kronis menjadi sirosis dan karsinoma hati. Protein X VHB (HBx) diketahui berkontribusi dalam patogenesis karsinoma hati. Struktur HBx terdiri dari 4 ikatan disulfida dan 53,7% asam amino hidrofobik menyebabkan ekspresi HBx di Escherichia coli (E. coli) dalam bentuk badan inklusi (BI). Tujuan penelitian ini adalah melakukan overproduksi, solubilisasi, renaturasi, dan purifikasi protein HBx fusi Tioredoksin (Trx-HBx). Pada penelitian ini, protein Trx-HBx diekspresikan di E. coli Rosettagami pada suhu rendah. Overproduksi protein dioptimasi pada variasi suhu induksi (17°C dan 25°C) dan variasi waktu induksi (8 jam dan 16 jam). Protein dikarakterisasi menggunakan analisis SDS-PAGE, dot blot, dan Western blot. Hasil penelitian ini menunjukkan protein Trx-HBx mayoritas diekspresikan dalam bentuk BI pada kondisi optimum suhu 25°C dan waktu induksi 16 jam. Trx-HBx sebagai BI berhasil disolubilisasi dalam dapar solubilisasi 6 M urea. Trx-HBx terlarut dalam 6 M urea direnaturasi simultan dengan purifikasi menggunakan kromatografi afinitas kolom nikel. Protein Trx-HBx berhasil dipurifikasi pada imidazol 200 mM elusi keempat dan kelima, namun hasil analisis SDS-PAGE reduksi dan nonreduksi tidak menunjukkan pembentukan ikatan disulfida setelah renaturasi.