Perpustakaan Digital ITB

Infeksi virus Hepatitis B (VHB) dapat menyebabkan penyakit hepatitis B dan menjadi salah satu penyebab utama perkembangan karsinoma hati. Salah satu faktor dari virus yang diduga dapat menginduksi transformasi sel tumor adalah protein X atau HBx. Mutasi pada gen x VHB menyebabkan terbentuknya mutan HBx seperti mutan T118N dan K130M/V131I, yang ditemukan pada sampel klinik di Indonesia dengan prevalensi yang cukup tinggi. Penelitian sebelumnya telah menunjukkan bahwa HBx T118N dan K130M/V131I dapat meningkatkan ekspresi gen hspa6 pada sel HepG2 dibandingkan dengan HBx wild type dari hasil analisis next generation sequencing. Penelitian ini bertujuan untuk mengkonfirmasi pengaruh HBx T118N dan HBx K130M/V131I terhadap ekspresi hspa6 pada sel HepG2 menggunakan metode quantitative polymerase chain reactions (qPCR). Primer untuk gen hspa6 diperoleh dari jurnal, katalog komersial (OriGene™), dan hasil rancangan menggunakan NCBI Primer-BLAST. Plasmid sebagai vektor ekspresi HBx wild type dan mutan dikonfirmasi dengan analisis migrasi, analisis restriksi, dan Sanger sekuensing. RNA total dari sel HepG2 yang telah ditransfeksi dengan plasmid tersebut kemudian diisolasi dan ditranskripsi balik menjadi cDNA sebagai cetakan untuk qPCR. Primer set 2 HSPA6 dipilih berdasarkan hasil optimasi qPCR dan hasil penentuan efisiensi primer menggunakan perangkat lunak LinRegPCR menunjukkan efisiensi 100,35%. Analisis ekspresi hspa6 kemudian ditentukan dengan metode kuantifikasi relatif Livak dengan hgapdh sebagai gen referensi. Keberadaan HBx T118N dan HBx K130M/V131I dapat meningkatkan ekspresi gen hspa6 pada sel HepG2 dibandingkan dengan HBx wild type sesuai dengan hasil NGS.