Perpustakaan Digital ITB

Diabetes nefropati (DN) adalah komplikasi utama dari diabetes melitus yang dapat menyebabkan gagal ginjal kronis dan end-stage renal disease (ESRD). Transforming Growth Factor-Beta 1 (TGF-????1) merupakan mediator utama dalam patogenesis DN. Meskipun terapi konvensional seperti penghambat sistem renin-angiotensin (RAS) telah digunakan untuk memperlambat progresi DN, pendekatan ini tidak secara langsung menargetkan mekanisme patogenesis utama DN sehingga masih gagal sepenuhnya mencegah perkembangan DN menjadi ESRD. Salah satu pendekatan yang potensial dikembangkan adalah terapi genetik CRISPR-Cas9 untuk meredam ekspresi gen TGF-????1. Tujuan dari penelitian ini yaitu mengonstruksi sistem CRISPR-Cas9 dalam bentuk plasmid rekombinan yang menarget gen TGF-????1 ­ ??±?ã±?­ ?ãÿ ?? ??? ??ðÿ±??ð?????????ÿ menghantarkan plasmid tersebut ke sel mesangial pada ginjal. Plasmid pCas9/VRQR-sgRNA (Addgene No. 12975) digunakan untuk menyisipkan DNA pengkode sgRNA yang dirancang dengan perangkat lunak CHOPCHOP. DNA pengkode sgRNA dihasilkan dari annealing dua oligonukleotida sense dan antisense yang komplemen, kemudian disisipkan ke dalam vektor pCas9/VRQR-sgRNA, diligasi, dan ditransformasi ke Escherichia coli DH5????. Analisis migrasi, pemotongan, serta sekuensing mengonfirmasi kebenaran plasmid rekombinan yang memuat sgRNA dari koloni transforman. Plasmid rekombinan CRISPR Cas9 tersebut diformulasikan dalam liposom dengan metode hidrasi lapis tipis. Komposisi liposom yang digunakan adalah DPPC:DOTAP:kolesterol (6:3:2), PEG2000-DSPE 15 mol%, serta NaOl 10 mol%. Karakterisasi liposom menghasilkan ukuran partikel 93,92 ± 3,21 nm, zeta potensial +29,09 ± 3,67 mV, dan efisiensi enkapsulasi plasmid 89,35%. Berdasarkan hasil tersebut, penelitian ini berhasil mengonstruksi plasmid CRISPR Cas9 bertarget gen TGF-????1 dan mengembangkan liposom-plasmid yang memiliki karakteristik seusai spesifikasi untuk penghantaran ke sel mesangial (ukuran partikel 60-120 nm, zeta potensial +(10-30) mV).