Siklodekstrin (CD) merupakan suatu molekul oligosakarida siklis yang tersusun dari 6,
7 dan 8 unit gula yang berturut-turut disebut sebagai CD ?, ?, dan ?. CD dapat
diproduksi dengan reaksi enzimatik yang dikatalisis oleh CD glikosiltransferase
(CGTase) melalui pembentukan ikatan ?-1,4 glikosidik. Meningkatnya kebutuhan CD
dalam industri memicu upaya ekspresi CGTase rekombinan di Escherichia coli. Pada
penelitian ini, rCGTase yang diekspresikan dari gen sintetik telah berhasil dioptimasi
produksinya menggunakan dua jenis sel inang, berbagai konsentrasi IPTG sebagai
penginduksi dan suhu inkubasi pasca induksi. Perolehan rCGTase paling tinggi
diperoleh pada Escherichia coli BL21(DE3) dengan induksi IPTG 0,1 mM.
Peningkatan jumlah rCGTase terlarut diperoleh dengan menurunkan suhu inkubasi
pada 25 °C. rCGTase berukuran 76 kDa dan telah berhasil dimurnikan menggunakan
kolom afinitas nikel dengan konsentrasi imidazol bertingkat untuk memisahkannya
dari protein pengotor. Perolehan kembali rCGTase setelah dimurnikan sebesar 7,79%
dari total protein terlarutnya. Protein tersebut terbukti aktif untuk siklisasi-?dan
hidrolisis pati melalui metode zymografi. Aktivitas siklisasi-?menggunakan substrat
terpregelatinasi dua kali lebih tinggi dibandingkan aktivitas tanpa pregelatinasi, suhu
optimum reaksi adalah 55 °C dan T50 enzim ini adalah 62 °C. Sagu adalah substrat
yang memberi aktivitas tertinggi pada pengujian menggunakan media Horikoshi. Rasio
siklisasinya untuk CD diukur menggunakan kromatigrafi cair kinerja tinggi dan
memberikan hasil rasio siklisasi untuk ?, ?, dan ?siklodekstrin adalah 5: 80:15 pada
kondisi substrat terpregelatinasi dan 6:81:13 pada kondisi substrat tanpa pregelatinasi.
Kinetika reaksi rCGTase diukur berdasarkan aktivitas siklisasi-?. Nilai Vmax, Km dan
Kcat berturut-turut adalah 19,23 mg CD-?/mg CGTase/min; 7,347 mg/ml;
1105,17/detik dan efisiensinya (Kcat/Km) adalah 150,42.