Perpustakaan Digital ITB

Induced Pluripotent Stem Cell (iPSC) adalah sel-sel pluripoten hasil pemrograman ulang yang dengannya tidak diperlukan pemanenan embrionik yang menghadapi berbagai isu bioetika. Vektor episom merupakan salah satu metode menghasilkan iPSC via pemrograman ulang sel somatik seperti umbilical cord mesenchymal stromal cell (UCMSC) dengan keunggulan cost-effective, mudah diperbanyak, dan bisa menghasilkan iPSC tingkat klinis tetapi efisiensi pemrograman ulang metode ini masih tergolong rendah. Efisiensi transfeksi dari vektor episom dapat ditingkatkan melalui optimasi parameter elektroporasi sehingga efisiensi pemrograman ulang pun diharapkan dapat meningkat. Penelitian ini bertujuan untuk mengamati voltase dan panjang pulsa optimal untuk mentransfeksi UC-MSC, serta untuk mengamati reagen pendukung terbaik yang digunakan untuk mentransfeksi sel. Penelitian dilakukan dengan mentransfeksikan UCMSC dengan pCMV-eGFP menggunakan variasi voltase 200 V, 250 V, 300 V, 400 V, dan 500 V disertai reagen pendukung CloneR dan P188 lalu 5 hari setelahnya sel dihitung dan dibaca ekspresi GFP-nya. Selanjutnya dilakukan optimasi panjang pulsa dengan rangkaian yang serupa menggunakan variasi 7.5 ms, 8 ms, 8.5 ms, 9 ms, dan 9.5 ms dengan reagen pendukung CloneR, P188, dan Rock(Y) inhibitor. Selanjutnya UC-MSC ditransfeksi episom pemrograman ulang menggunakan parameter yang dioptimasi dan dibaca marka pemrograman ulangnya. Hasil yang didapatkan menunjukkan UC-MSC yang ditransfeksi dengan voltase 200V dan reagen pendukung CloneR menghasilkan sel viabel tertinggi dan populasi sel bermarka GFP terbanyak bersama dengan UC-MSC yang ditransfeksi dengan panjang pulsa 8.5 ms dan reagen pendukung CloneR. Meskipun iPSC belum berhasil terbentuk dan marka-marka pemrograman ulang tidak diekspresikan, perubahan morfologi yang teramati mengindikasikan adanya proses pemrograman ulang yang terjadi pada sel. Dengan demikian pada penelitian ini didapatkan voltase 200 V dan panjang pulsa 8.5 ms menjadi parameter terbaik untuk mentransfeksi UC-MSC serta reagen CloneR menjadi reagen pendukung terbaik.