Perpustakaan Digital ITB

Dalam rangka meningkatkan dan mempercepat produksi artemisinin, dilakukan upaya produksi artemisinin serta terpenoid lain secara semisintetik dengan menyertakan pendekatan rekayasa genetika pada mikroba menjadi satu alternatif produksi yang berkelanjutan. Promiskuitas amorfadiena sintase memungkinkan enzim tersebut untuk menggunakan farnesil terhidroksilasi (12-OH FPP) sebagai substrat untuk menghasilkan aldehida artemisinat. Hal tersebut dapat mempersingkat tahapan biosintesis artemisinin. Diketahui CYP124 Mycobacterium tuberculosis memiliki kemampuan mengkatalisis reaksi ?-hidroksilasi pada FPP. Namun, aktivitas CYP124 memerlukan protein pembawa dan transfer elektron dari NADPH/NADH, yaitu feredoksin atau flavodoksin, dan feredoksin (flavodoksin) reduktase. Penelitian ini dilakukan dalam rangka mengkloning gen yang mengkode ketiga protein tersebut dan disisipkan pada vektor ekspresi pET16b melalui metode QuickStep-Cloning dan Circular Polymerase Extension Cloning (CPEC). Kloning gen menggunakan QuickStep-Cloning belum berhasil dilakukan karena belum mendapatkan ssDNA dari hasil PCR asimetri. Kloning gen menggunakan metode CPEC berhasil ditransformasikan dalam sel kompeten Escherichia coli DH5?. Keberhasilan kloning dikonfirmasi melalui PCR koloni, analisis restriksi dan analisis urutan DNA. Gen fpr telah berhasil disisipkan ke dalam pET16b. Tahapan penelitian dilanjutkan dengan percobaan ekspresi protein pada suhu 37oC dengan induksi IPTG dan tanpa induksi IPTG.