digilib@itb.ac.id +62 812 2508 8800

KONSTRUKSI GENOM ADENOVIRUS DENGAN KOMPONEN OPERON LAC UNTUK PRODUKSI KANDIDAT VAKSIN COVID-19

Penulis : Arrie Arifa Arbuati [20720315]
Kontributor / Dosen Pembimbing :
  • Dr. apt. Aluicia Anita Artarini, S.Si., M.Sc.,.
  • Ernawati Arifin Giri-Rachman, M.Si., Ph.D.
Jenis Koleksi : Tesis
Tahun Terbit :
Penerbit : Farmasi
Fakultas : Sekolah Farmasi
Subjek :
Kata Kunci : adenovirus, vaksin COVID-19, Sistem Lac, lac operon
Sumber :
Staf Input/Edit : yana mulyana  
File : 1 file
Tanggal Input : 16 Agu 2023

Pengembangan vaksin COVID-19 berbasis adenovirus sebagai vektor penghantar gen spike virus SARS-CoV-2 dilakukan sebagai bentuk penanganan pandemi. Sistem Lac merupakan sistem regulasi transkripsi yang dapat digunakan untuk inhibisi ekspresi protein Spike pada sel inang untuk produksi adenovirus yang optimal. Penelitian ini bertujuan untuk mengkonstruksi genom adenovirus dengan operon lac sebagai komponen regulasi Sistem Lac untuk produksi kandidat vaksin COVID-19. Gen sintetik dirancang untuk memiliki komponen operon lac, SV40 intron, dan multiple cloning site (MCS). Sisi pemotongan enzim restriksi dipetakan pada rancangan gen sintetik untuk keperluan konstruksi plasmid pShuttleCMV-lacO-Spike dan pShuttleCMV-lacO-Intron-Spike dengan metode restriksi dan ligasi. Rekombinasi homolog antara pShuttleCMV-lacO-Spike dengan genom adenovirus pAdEasy berhasil dilakukan pada bakteri Escherichia coli BJ5183. Keberadaan gen hekson, gen spike, dan operon lac pada pAdEasylacO-Spike diidentifikasi menggunakan PCR dengan primer spesifik. Hasil analisis PCR menunjukkan ukuran eksperimental 146 pb untuk gen hekson (ukuran teoritis 168 pb), 3.872 pb untuk gen spike (ukuran teoritis 3.848 pb), dan 2.201 pb untuk operon lac (ukuran teoritis 2.070 pb), membuktikan keberadaan ketiga gen tersebut pada pAdEasy-lacO-Spike. Produksi awal adenovirus dilakukan dengan cara transfeksi pAdEasy-lacO-Spike pada sel AD293, dengan pAdEasy-Spike dan pAdyEasy-lacZ sebagai pembanding. Keberhasilan produksi adenovirus dikonfirmasi menggunakan PCR dengan primer spesifik. Hasil analisis PCR menunjukkan ukuran eksperimental 148 pb untuk gen hekson (ukuran teoritis 168 pb) dan 183 pb untuk gen spike (ukuran teoritis 183 pb). Titer adenovirus yang diproduksi dari hasil transfeksi adalah sebanyak 6,12 × 105 IFU/mL untuk AdV-lacO-Spike, 7,65 × 105 IFU/mL untuk AdV-Spike, dan 1,07 × 106 IFU/mL untuk AdV-lacZ. Titer adenovirus AdV-lacO-Spike yang sebanding dengan AdV-Spike membuktikan keberhasilan produksi awal AdVlacO-Spike, dengan kemampuan produksi adenovirus dari pAdEasy-lacO-Spike sebanding dengan pAdEasy-Spike.

Artikel Terkait