Perpustakaan Digital ITB

Selulosa, komponen utama dinding sel merupakan biopolimer paling melimpah di permukaan bumi. Polimer selulosa dapat dihidrolisis menjadi produk lain yang berguna dengan bantuan enzim selulase. Selulosa dapat dihidrolisis menjadi glukosa oleh tiga macam enzim selulase yang bekerja secara simultan yaitu: endoglukanase, eksoglukanase (selobiohidrolase) dan ?-glukosidase. Metagenomik adalah isolasi dan analisis gen secara langsung dari lingkungan mikroorganisme. Pada penelitian sebelumnya telah berhasil diisolasi gen parsial ?-glukosidase (bglA1 dan bglA4) dari DNA metagenom bakteri termofilik sumber air panas Cimanggu Jawa Barat. Penelitian ini bertujuan untuk mengekspresikan gen parsial ?-glukosidase, dan mengkarakterisasi aktivitas optimum enzim ?-glukosidase. Dua sekuen gen parsial ?-glukosidase telah berhasil diinsersi ke dalam vektor ekspresi pET-32b. Plasmid pET-32b rekombinan ini kemudian digunakan untuk mentransformasi sel kompeten E. coli BL21. Setelah diinduksi isopropil ?-D-1-tiogalaktopiranosida (IPTG) sel inang E. coli BL21 berisi vektor rekombinan ini berhasil mengekspresi enzim ?-glukosidase berukuran 38 kDalton. Hasil optimasi menunjukkan waktu inkubasi optimum untuk produksi enzim ?-glukosidase dalam sel inang E. coli BL21 (DE3) adalah 3 jam setelah induksi IPTG. Pengujian secara kualitatif enzim ?-glukosidase dengan substrat p-nitrophenyl-?-D-glucopyranoside (pNPG) menunjukan hasil positif. Setelah diketahui adanya aktivitas enzim maka dilakukan optimasi suhu dan pH aktivitas enzim ?-glukosidase. BglA1 dan BglA4 memiliki suhu optimum 90°C. Sedangkan pH optimum untuk BglA1 yaitu 8,6 dan pH optimum BglA4 adalah 9,0. Hasil perbandingan struktur tiga dimensi BglA1 dan BglA4 dengan ?-glukosidase Clostridium cellulovorans diketahui bahwa kedua sekuen tidak memiliki struktur ?-barel (?1) dan ? heliks (?1) serta daerah loop A. Berdasarkan hasil yang diperoleh dapat disimpulkan bahwa gen parsial enzim ?-glukosidase yang diisolasi dari DNA metagenom sumber air panas Cimanggu memiliki aktivitas dan bersifat termostabil.