Perpustakaan Digital ITB

Lipase (triacylglyserol acylhidrolase E.C.3.1.1.3) merupakan suatu enzim yang dapat mengkatalisis reaksi hidrolisis dari trigliserida dan ester lain yang tidak larut dalam air. Lipase termostabil yang diisolasi dari mikroorganisme termofilik telah mendapatkan banyak perhatian karena sangat potensial untuk digunakan dalam aplikasi bioteknologi. Enzim lipase telah banyak dimanfaatkan dalam berbagai bidang industri, seperti industri deterjen, makanan, tekstil, obat-obatan, kertas dan kosmetik. Beberapa bakteri termofilik dari sampel kompos telah dikultivasi di laboratorium, salah satunya adalah AL17. Isolat ini telah diidentifikasi melalui urutan gen 16S rRNA dan diketahui merupakan Pseudoxanthomas sp. Gen pengkode lipase telah diperoleh dari isolat tunggal Pseudoxanthomonas sp yang dikloning ke dalam vektor pJET 1.2/blunt. Pada penelitian ini, lipase dari Pseudoxanthomonas sp (AL17) telah diekspresikan dalam host Eschericia coli BL21(DE3) menggunakan vektor pET-30a(+). Ekspresi protein rekombinan dilakukan pada kondisi suhu 37oC, diinduksi dengan Isopropyl β-D-1- thiogalactopyranoside (IPTG) 1 mM, agitasi 150 rpm dan diinkubasi selama 4 jam. Hasil overekspresi gen lipase AL17 telah dianalisis menggunakan Sodium Dodecyl Sulfate-Polyacrylamide Gel Electrophoresis (SDS-PAGE) dan menghasilkan pita tebal berukuran 34,5 kDa . Melalui analisis densitometrik menggunakan software imageJ, Lipase AL17 telah berhasil diekspresikan sekitar 42,07% dari total protein. Lipase AL7 telah berhasil dimurnikan menggunakan kromatografi affinitas Nickel-Nitroleacetic Acid (Ni-NTA). Hasil purifikasi memiliki aktivitas spesifik sebesar 0.043 unit/mg, meningkat 1,58x dari ekstrak kasar. Melalui pengujian spesifisitas substrat, aktivitas lipase AL17 yang terbaik pada penggunaan substrat p-nitrofenil dekanoat (C10). Suhu dan pH optimum dari lipase AL17 adalah 70oC dan pH 8. Berdasarkan hasil karakterisasi tersebut Lipase AL17 memiliki potensi untuk dapat digunakan sebagai biokatalis dalam bidang industri yang menggunakan suhu tinggi.