Perpustakaan Digital ITB

GDSL esterase/lipase adalah subkelas baru enzim lipolitik yang tergolong unik. Residu katalitik serin GDSL terletak di dekat ujung N rantai polipeptida, sedangkan residu katalitik serin enzim lipolitik pada umumnya terletak bukan pada ujung N. Selain itu enzim GDSL memiliki aktivitas yang beragam karena substratnya bervariasi. Penelitian ini bertujuan untuk mengsubkloning gen pengode GDSL keluarga lipase dari Bacillus aquimaris MKSC 6.2 dengan dan tanpa sinyal sekuens. Keberadaan sinyal sekuens ini akan digunakan untuk mempelajari pola sekresi dan kestabilan protein lipolitik di masa mendatang. Gen pengode GDSL dengan dan tanpa sinyal sekuens diamplifikasi dengan metode polymerase chain reaction (PCR) menggunakan primer yang mengandung urutan nukleotida yang dikenali endonuklease NdeI dan XhoI. Fragmen gen hasil PCR ini kemudian dikloning dengan vektor pGEM-T, menghasilkan plasmid rekombinan pGEM-T-gdsl. Konfirmasi keberadaan fragmen gdsl dilakukan dengan metode PCR koloni, analisis restriksi, dan penentuan urutan nukleotida (sequencing). Proses selanjutnya adalah penyambungan fragmen gdsl yang telah dipotong NdeI dan XhoI dengan plasmid ekspresi pET30a, menghasilkan plasmid rekombinan pET30a-gdsl. Keberadaan gen gdsl pada plasmid rekombinan pET30a-gdsl telah dikonfirmasi dengan PCR koloni. Analisis in silico menunjukkan bahwa GDSL dari B. aquimaris MKSC 6.2 memiliki persentasi kemiripan 90% dengan lipase dari Bacillus sp. dan 78% dengan GDSL keluarga lipase dari Bacillus vietnamensis. Oleh karena itu, protein GDSL dari B. aquimaris MKSC 6.2 diharapkan memiliki substrat yang unik dengan karakteristik biokimia dan biofisika yang baru.