Perpustakaan Digital ITB

Rekayasa metabolisme pada bakteri dapat menghasilkan senyawa metabolit sekunder secara heterolog. CYP124 dari Mycobacterium tuberculosis dapat menghidroksilasi farnesil pirofosfat (FPP) pada C?menghasilkan 12OH-FPP. FPP terhidroksilasi dapat menjadi prekursor amorfadien sintase (ADS) yang menghasilkan asam dihidroartemisininat sehingga akan mengurangi tahapan biosintesis pada produksi artemisinin. Optimasi ekspresi CYP124 dilakukan dengan Response Surface Methodology. Kondisi optimal dapat ditentukan dengan memvariasikan konsentrasi FeCl3, 5-ALA, dan IPTG dalam media. Parameter yang diukur dari perlakuan tersebut adalah R/Z, massa CYP124 dari hasil SDS-PAGE, dan karakterisasi CYP124. SDS-PAGE hasil pemurnian CYP124 menunjukkan 1 pita pada ukuran sekitar 45 kDa. Faktor yang mempengaruhi massa CYP adalah interaksi IPTG dan 5-ALA. 5-ALA juga mempengaruhi nilai R/Z. Validasi untuk hasil desain optimal disesuaikan dengan prediksi massa CYP dan nilai R/Z. Desain optimal ekspresi CYP124 adalah penambahan 0,10 mM FeCl3, 1 mM 5-ALA, dan 0,2427 mM IPTG. Untuk memastikan CYP124 yang dihasilkan dapat bekerja, uji aktivitas dapat dilakukan.