Perpustakaan Digital ITB

Adenovirus adalah vektor virus yang umum digunakan pada vaksin, termasuk vaksin COVID-19. Produksi vektor adenovirus dapat terganggu oleh ekspresi gen target yang tidak diinginkan pada sel produsen sehingga diperlukan regulasi ekspresi untuk produksi yang optimal. Penelitian ini bertujuan mengonstruksi sel HEK293-lacI dan genom adenovirus dengan operator lac (lacO) dan intron untuk produksi kandidat vaksin COVID-19 dengan sistem regulasi operon lac. Sel HEK293-lacI dikonstruksi melalui transfeksi pCMV-lacI dan diseleksi dengan higromisin selama 12 hari. Sel hasil transfeksi berhasil tumbuh dan diperbanyak sementara kontrol negatif tereliminasi di media dengan higromisin 100 µg/mL. Namun, sel hasil transfeksi belum berhasil ditumbuhkan setelah penyimpanan dan karakterisasi dengan polymerase chain reaction (PCR) tidak menunjukkan keberadaan gen lacI. Konstruksi sel HEK293-lacI belum berhasil dilakukan dan diduga karena gen lacI tidak terintegrasi sempurna ke genom sel. Pada penelitian sebelumnya, pShuttle-LacO-IntronSpike telah dikonstruksi untuk membawa gen spike dengan lacO sebagai situs pengikatan represor lac (LacI) dan urutan intron sebagai strategi peningkatan ekspresi spike di tubuh manusia. Pada penelitian ini, pShuttle-LacO-Intron-Spike direkombinasi dengan genom adenovirus dari pAdEasy di Escherichia coli BJ5183. Karakterisasi pAdEasy-LacO-Intron-Spike melalui PCR dengan tiga pasang primer untuk mendeteksi gen spike, lacO dan intron, serta gen hekson menunjukkan produk dengan ukuran eksperimental berturut-turut 3848, 2585, dan 153 pb. Hasil ini mengonfirmasi keberadaan gen spike, lacO, intron, dan hekson sehingga rekombinasi terbukti berhasil. pAdEasyLacO-Intron-Spike ditransfeksikan ke sel AD293 untuk produksi vektor adenovirus dengan pembanding pAdEasy-LacZ, pAdEasy-Spike, dan pAdEasy-LacO-Spike. Karakterisasi genom AdVLacO-Intron-Spike melalui PCR dengan dua pasang primer yang mendeteksi gen spike dan hekson menghasilkan produk dengan ukuran eksperimental berturut-turut 175 pb dan 152 pb. Hasil ini mengonfirmasi keberadaan gen spike dan hekson sehingga AdV-LacO-Intron-Spike terbukti berhasil diproduksi. Hasil perhitungan titer virus melalui immunostaining untuk AdV-LacZ, AdV-Spike, AdVLacO-Spike, dan AdV-LacO-Intron-Spike berturut-turut sebesar 1,5 x 106 ; 7,8 x 105 ; 7,7 x 105 ; dan 7,6 x 105 infectious units (IFU)/mL. Titer virus AdV-LacO-Intron-Spike yang tidak berbeda jauh dengan pembanding AdV-Spike menunjukkan kemampuan pAdEasy-LacO-Intron-Spike yang sebanding dalam produksi vektor adenovirus. Hasil ini membuktikan bahwa genom adenovirus dengan lacO dan intron untuk produksi kandidat vaksin COVID-19 telah berhasil dikonstruksi.