Perpustakaan Digital ITB

Human papillomavirus (HPV) merupakan virus yang menyebabkan kanker serviks dengan mekanisme penularan secara seksual. Terdapat 200 jenis tipe HPV yang telah dikarakterisasi dan HPV 33 merupakan subtipe risiko tinggi penyebab kanker serviks. Vaksinasi adalah cara paling efisien untuk mencegah penyakit menular, termasuk infeksi karena HPV. Beberapa vaksin HPV profilaksis berbasis Virus Like Particle (VLP) sudah dikomersialkan dengan sistem ekspresi berbasis eukariotik. Sistem ekspresi berbasis prokariotik menjadi alternatif menjanjikan karena produksinya lebih mudah dan hemat biaya. Vaksin VLP HPV pada sel prokariotik sudah terbukti aman dan imunogenik melalui uji klinik fase III vaksin Cecolin. Tujuan penelitian ini adalah mengkonstruksi plasmid pET-15b yang membawa gen pengkode protein L1 HPV 33 untuk diekspresikan pada sel inang Escherichia coli. Gen L1 HPV 33 berukuran 1500 pb berasal dari amplifikasi menggunakan PCR dari plasmid pD902_L1HPV33. Vektor pET-15b berukuran 5708 pb berasal dari pemotongan plasmid pET-15b_Katalase. DNA sisipan dan vektor diligasi dengan perbandingan 1:3, 1:5, dan 1:8 melalui sisi pemotongan enzim restriksi NdeI dan BamHI. Hasil ligasi ditransformasikan ke E. coli DH5?. Ligasi berhasil dilakukan untuk seluruh komposisi perbandingan. Kandidat plasmid pET-15b_L1HPV33 yang terpilih dari perbandingan 1:8 berhasil dikonfirmasi kebenarannya melalui analisis migrasi dan analisis pemotongan. Plasmid pET-15b_L1HPV33 ditransformasikan ke E. coli BL21(DE3). Overproduksi protein L1 HPV 33 pada E. coli BL21(DE3) dilakukan dengan induksi menggunakan IPTG konsentrasi 0; 0,1; 0,5; dan 1 mM. Protein L1 HPV 33 dengan ukuran 55,5 kDa belum terekspresikan berdasarkan konfirmasi SDS-PAGE.