Perpustakaan Digital ITB

Produksi artemisinin secara semisintesis memerlukan mikroorganisme rekombinan. Amorfadiena sintase (ADS) sebagai enzim kunci dalam biosintesis artemisinin memiliki kemampuan untuk menerima substrat farnesil difosfat yang terhidroksilasi. Hal ini memungkinkan biosintesis prekursor artemisinin secara nonkanonikal tanpa melibatkan CYP71AV1 dari Artemisia annua. Namun diperlukan enzim yang memiliki kemampuan untuk menghidroksilasi farnesil difosfat (FDP) sebagai substrat ADS. Diketahui CYP124 Mycobacterium tuberculosis memiliki kemampuan untuk menghidroksilasi asam lemak bercabang metil pada C? serta isoprenoid, termasuk FDP. Penelitian ini dilakukan dalam rangka melakukan konstruksi dan ekspresi CYP124 sebagai tahap awal dalam meningkatkan produksi prekursor artemisinin. Pada penelitian ini, dilakukan kloning cyp124 pada plasmid pET16b yang ditransformasikan ke dalam sel kompeten Escherichia coli DH5?. Adapun kloning dilakukan dengan 2 metode yakni, dengan ligasi dan tanpa ligasi (circular polymerase extension cloning/CPEC). Melalui proses CPEC, didapatkan beberapa koloni yang terkonfirmasi membawa gen cyp124 dalam plasmid pET16b. Konfirmasi dilakukan dengan reaksi PCR koloni, analisis restriksi, dan analisis urutan DNA. Ekspresi protein CYP124 dilakukan dengan 2 kondisi inkubasi, suhu 25°C dan 37°C, dengan induksi IPTG dan tanpa induksi IPTG. Protein CYP124 diduga dapat terekspresikan, namun diperlukan pengujian lebih lanjut untuk mengonfirmasi ekspresi tersebut.