Perpustakaan Digital ITB

Penyakit kardiovaskular merupakan gangguan pada fungsi normal jantung dan pembuluh darah, seperti serangan jantung (infark miokard) dan stroke iskemia. Penyakit ini menjadi penyebab kematian nomor satu di dunia. Pengobatan yang dapat dilakukan adalah dengan agen trombolitik seperti reteplase. Saat ini, produksi protein reteplase telah dilakukan secara rekombinan menggunakan sel prokariot (Escherichia coli). Dalam sistem ekspresi gen menggunakan E. coli, promotor dibutuhkan untuk menginisiasi terjadinya transkripsi DNA menjadi mRNA yang kemudian diubah menjadi protein reteplase. Pada penelitian ini, promotor yang dimanfaatkan adalah promotor autoinduksi dps (plasmid pCAD2_ret) dan gadA (plasmid pMCD_ret). Site-Directed Mutagenesis (SDM) dilakukan pada kedua plasmid tersebut untuk mengubah struktur sekunder mRNA agar daerah RBS dan kodon start berada dalam kondisi bebas sehingga diharapkan proses translasi berjalan dengan baik. SDM juga dilakukan pada daerah upstream kodon start plasmid pCAD2_ret dengan delesi basa GAT pada urutan ke-15 sampai ke-17. SDM pada daerah downstream kodon start dengan substitusi basa pCAD2_ret dan pMCD_ret pada kodon ke 5 dan 6 yaitu CAC-5- CAT dan CAT-6-CAC. SDM dilakukan dengan metode Single-Primer Reactions in Parallel (SPRINP). Hasil penentuan urutan DNA menunjukkan bahwa mutasi hanya berhasil dilakukan pada daerah downstream kodon start untuk kedua plasmid. Untuk melihat pengaruh mutasi terhadap produksi protein reteplase maka dilakukan produksi protein menggunakan E. coli TOP10 yang membawa plasmid pCAD2_ret hasil SDM daerah CDS dengan kondisi 37°C, 150 rpm, 24 jam, pada 30 mL media LB cair. Hasil analisis produksi protein terhadap hasil lisis cepat dengan SDS-PAGE menunjukkan produksi protein reteplase menggunakan E. coli TOP10 yang membawa plasmid pCAD2_ret SDM daerah CDS berhasil dilakukan dengan adanya pita protein pada ukuran 40,9 kDa.