Perpustakaan Digital ITB

Pati merupakan homopolimer glukosa yang tersusun atas amilosa dan amilopektin. a-Amilase (EC. 3.2.1.1) adalah enzim yang menghidrolisis pati pada ikatan a-1 ,4-glikosidik menghasilkan oligosakarida tinier dan bercabang. Sebuah a-amilase BmaNl telah berhasil diisolasi dari Bacillus megaterium NL3 di Danau Kakaban, Pulau Derawan, Indonesia. Ekspresi bmaN I pada Escherichia coli BL21 (DE3) menghasilkan BmaN 1 dalam bentuk badan inklusi. Agregasi protein diduga disebabkan oleh terdapatnya heliks transmembran yang bersifat hidrofobik pada ujung C protein. Tujuan penelitian ini adalah mengkonstruksi dan mengekspresikan mutan a-ami lase BmaN1 tanpa 22 residu asam amino hidrofobik pada ujung C sebagai protein terlarut. Mutasi BmaNI telah berhasil dilakukan terhadap kodon GGG yang mengkode Gly440 menghasiikan kodon stop TAG melalui teknik PCR (Polymerase Chain Reaction). Keberhasilan mutasi telah diverifikasi melalui DNA Sequencing. Penapisan satu faktor optimasi ekspresi bmaN iiJC telah dilakukan, yakni variasi sel inang E. coli BL21 (DE3) dan E. coli ArcticExpress (DE3). Hasil menunjukkan bahwa ekspresi optimum pacta D. wli I3L21 (D.CJ ) yang ditandai dengan adanya ak.tivitas spesifik a-amilase yang tinggi dan konsisten. Analisis SDS-PAGE menunjukkan BmaNl dan BmaN 1 L1C memiliki massa molekul masing-masing sebesar -55 kDa dan -49 kDa. Aktivitas a-amilase dari ekstrak kasar BmaN 1 dan BmaNl t:1C ditentukan berdasarkan jumlah gula pereduksi yang dihasilkan dari hidrolisis pati terlarut dan menta h Aktivita<; <;pe<;ifik terhlldap pMi terlamt dl'!ri Rmi'!Nl dan RmllN 1 A(' masing-masing adalah 22,92 U/mg dan 80,23 U/mg. Derajat hidrolisis pati mentah pada BmaN1 L1C terhadap sagu, ganyong, gandum, dan singkong masing­ masing adalah 13,58%, 11,60%, 27,17%, dan 14,84%. Sementara BmaNl relatif tidak memiliki aktivitas hidrolisis pati mentah terhadap substrat tersebut.