Perpustakaan Digital ITB

?-Amilase adalah endoenzim yang mengkatalisis pemutusan ikatan ?-1,4 glikosidik pada polisakarida menghasilkan maltooligosakarida, maltodekstrin, dan sejumlah kecil glukosa. ?-Amilase digunakan dalam berbagai jenis industri, seperti industri pengolahan pati, tekstil, roti, dan farmasi. Produksi ?-amilase untuk keperluan komersial membutuhkan sel inang yang memiliki kemampuan untuk menghasilkan ?-amilase dalam jumlah besar secara efisien. Sistem ekspresi Pichia pastoris menawarkan sejumlah kemudahan yang memungkinkan produksi ?-amilase secara efisien, yaitu memiliki efisiensi sekresi yang tinggi, mampu tumbuh hingga mencapai densitas sel yang tinggi, dan memiliki media kultur yang murah. Tujuan penelitian ini adalah mempelajari ekspresi gen ?-amilase (ALP1) Saccharomycopsis fibuligera R64 yang meliputi penentuan kondisi produksi optimum dan pengaruh mutasi terhadap kestabilan ALP1. P. pastoris KM71H telah berhasil ditransformasi dengan plasmid rekombinan yang mengandung gen ALP1 dan alp1. Gen ALP1 dan alp1 difusi dengan promotor AOX1 yang dapat diinduksi oleh metanol. Kultur P. pastoris [pPICZ?A-ALP1] diinkubasi selama 24, 48, 72, 96, 120, dan 144 jam dalam media yang mengandung 0,5% (v/v) metanol. Aktivitas ?-amilase terbesar diperoleh pada kultur dengan waktu inkubasi 96 jam. Aktivitas ?-amilase tertinggi (8,2 x 105 U/mL) dicapai dengan menggunakan penginduksi 4% (v/v) metanol selama 96 jam. Karakterisasi terhadap ALP1 dan alp1 menunjukkan bahwa ALP1 dan alp1 memiliki pH optimum 5,5 dan suhu optimum 50ºC.