Perpustakaan Digital ITB

Chikungunya merupakan penyakit infeksi yang disebabkan oleh virus chikungunya (CHIKV) yang kembali mewabah di Indonesia dan di dunia. Genom virus chikungunya memiliki dua open reading frame (ORF) yang mengkode empat protein non-struktural (nsP1, nsP2, nsP3, nsP4) dan lima protein struktural (kapsid, E3, 6K, E1, E2). Salah satu protein struktural, yaitu protein selubung E1 dapat mendeteksi antibodi IgM anti-CHIKV dengan sensitif dan spesifik, sehingga protein E1 dapat digunakan sebagai basis dalam pembuatan kit diagnostik penyakit chikungunya. Tujuan penelitian ini adalah mengekspresikan protein E1 dari CHIKV pada Pichia pastoris. Gen pengkode protein E1 yang telah didapat dari penelitian sebelumnya diinsersikan ke dalam plasmid pPICZ?A sebagai vektor ekspresi. Transformasi Pichia pastoris dengan plasmid pPICZ?A-E1 dilakukan dengan teknik elektroporasi dan menghasilkan beberapa tansforman. PCR koloni menggunakan primer AOX1 mengkonfirmasi sembilan transforman yang positif mengandung gen E1. Penapisan pada media yang mengandung antibiotik zeosin dengan konsentrasi tinggi menunjukkan bahwa seluruh koloni memiliki multi insersi gen pengkode E1. Ekspresi protein E1 dilakukan pada sel inang Pichia pastoris KM71 dan Pichia pastoris GS115. Berdasarkan elektroforegram Sodium Dodecyl Sufate Polyacrilamide Gel Electrophoresis (SDS-PAGE), terdapat pita pada ukuran 57 kDa yang sesuai dengan ukuran protein E1. Terdapat satu transforman P. pastoris-pPICZ?A-E1 GS115 yang mengekspresikan protein dengan jumlah tertinggi pada hari ke-5 menggunakan induksi metanol 2%. Protein E1 yang diperoleh dimurnikan dengan kromatografi afinitas Ni-NTA. Elektroforegram SDS-PAGE menunjukkan bahwa tidak ditemukannya pita berukuran 57 kDa pada lajur elusi. Hasil ini menunjukkan bahwa protein E1 harus dimurnikan menggunakan teknik kromatografi selain kromatografi afinitas Ni-NTA.