Perpustakaan Digital ITB

Mycobacterium tuberculosis pada manusia. Hingga saat ini, vaksin yang efektif untuk menanggulangi TB belum ditemukan sehingga banyak penelitian diarahkan untuk menemukan vaksin TB baru. Dua di antara molekul kandidat vaksin TB adalah Protein Ag85B dan antigen Rv2660c. Protein Ag85B terlibat dalam proses transfer asam mikolat dari sitosol ke dinding sel M.tuberculosis. Ag85B juga memiliki fungsi imunologi karena dapat menginduksi poliferasi T-sel dan sekresi IFN-γ pada individu yang terekspos M. tuberculosis. Rv2660c merupakan protein yang diekspresikan secara konstan sepanjang tahapan infeksi M. tuberculosis sehingga dapat berasosiasi dengan infeksi laten dan juga mampu menginduksi respon imun. Tujuan penelitian ini adalah memproduksi dan memurnikan protein rekombinan Ag85B dan antigen fusi Ag85B-Rv2660c. Kedua protein ini diharapkan berpotensi sebagai kandidat vaksin TB. Untuk memproduksi kedua protein, gen pengode masing-masing protein dikonstruksi pada vektor ekspresi pMAL-c5x yang mengandung gen pengkode Maltose Binding Protein (MBP), marker antibiotik, dan promoter Tac. Oleh karena itu, setiap protein diproduksi pada media LB yang mengandung 100 μg/mL antibiotik ampisilin dengan IPTG (isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside, penginduksi promoter Tac) sebanyak 0,3 mM selama 24 jam pada suhu 4oC. Hasil analisis ekspresi gen pada Sodium Dodecyl Sulphate Polyacrylamide Gel Electrophoresis (SDS-PAGE) menunjukkan adanya pita berukuran ~72 kDa dan ~77 kDa yang secara berurutan merupakan ukuran protein antigen Ag85B dan antigen fusi Ag85B-Rv2660c. Kedua protein berada dalam keadaan larut di dalam bufer karena peranan protein MBP. Pemurnian protein rekombinan Ag85B dan antigen fusi Ag85B-Rv2660c telah dilakukan dengan metode kromatografi afinitas menggunakan resin amilosa menghasilkan secara berurutan yaitu 0,45 dan 0,15 mg protein murni. Berdasarkan profil pita protein murni pada SDS-PAGE, protein telah berhasil dimurnikan.