Perpustakaan Digital ITB

Indonesia merupakan negara kedua dengan kasus demam berdarah dengue (DBD) terbesar di dunia. Kementerian Kesehatan Republik Indonesia mencatat sepanjang bulan Januari hingga Mei 2017 sebanyak 0,64% pasien DBD meninggal dunia. Untuk mendapatkan penanganan yang tepat pada pasien terineksi virus dengue dibutuhkan diagnosis yang akurat dan cepat, sehingga dibutuhkan kitdiagnostik. Salah satu komponen penting dalam kit diagnostik adalah protein NS1. Protein NS1 merupakan antigen yang dapat berinteraksi dengan antibodi IgG dan IgM pada pasien yang terinfeksi virus dengue. Protein NS1 memiliki hidrofobisitas sebesar ⁓31% sehingga kelarutannya relatif rendah ketika diekspresi pada Escherichia coli Meningkatkan kelarutan protein DENV-4 NS1dapat dilakukan denganfusi protein tioredoksin.Tujuan dari penelitian ini adalah mengkonstruksi plasmid rekombinan pET32b-DENV4 -NS1 dan produksi protein DENV-4 NS1pada Escherichia coli . Fragmen gen pengkode DENV4 - NS1 berukuran 1.059 pasang basa (pb) diamplifikasi menggunakan teknik PCR dengan DNA templat pET16b - DEN V4 - NS1. Gen pengkode DENV4 - NS1 kemudian disisipkan ke vektor ekspresi pET32b pada sisi restriksi Eco RI dan Xho I sehingga diperoleh plasmid rekombinan pET32b - DENV4 - NS1 yang berukuran 6.931 pb. E. coli BL21(DE3) ditransformasi dengan plasmid rekombinan pET32 b - DENV4 - NS1 menggunakan metode heat shock dan diseleksi dalam media LB yang mengandung antibiotik ampisilin. Transforman E. coli BL21(DE3)/pET32b - DENV4 - NS1 ditumbuhkan dalam media 2x YT (tripton 1,6%, E kstrak ragi 1 %, dan NaCl 0,5%) dan diinduksi dengan IPTG 0,2 mM selama 4 jam pada suhu 37 o C. Analisis SDS - PAGE menunjukkan bahwa protein fusi Trx - DENV4 - NS1 memiliki massa molekul ⁓55 kDa. Agregat DENV - 4 NS1 dilakukan proses unfo l ding menggunakan urea 8M dengan pero leh kembali ⁓100%. Protein unfolded di refolding di dalam kromatografi kolom Ni - NTA dengan pengenceran urea secara bertahap. Pemotongan protein refolded Trx - DENV4 - NS1 dilakukan menggunakan thrombin. A nalisis elektroforesis gel SDS - PAGE menunjukkan massa molekul DENV - 4 NS1 ⁓45 kDa. P rotein rekombinan DENV - 4 NS1 dapat berinteraksi dengan antibodi monoklonal NS1 pada kit diagnostik komersial.