Perpustakaan Digital ITB

Virus influenza A subtipe H5N1 merupakan patogen avian yang menyebabkan wabah dengan tingkat mortalitas tinggi pada unggas serta berpotensi menginfeksi manusia. Pengembangan vaksin unggas H5N1 menjadi salah satu strategi utama untuk mengendalikan penyebaran virus dan menekan risiko penularan zoonosis. Namun, vaksin konvensional berbasis virus utuh yang diproduksi menggunakan telur ayam berembrio masih memiliki keterbatasan, antara lain waktu produksi yang relatif lama serta tidak mendukung penerapan strategi Differentiating Infected from Vaccinated Animals (DIVA). Sebagai alternatif, vaksin subunit berbasis protein hemaglutinin (HA) rekombinan dikembangkan dengan memanfaatkan sistem ekspresi Pichia pastoris, yang mampu menghasilkan protein rekombinan eukariotik melalui modifikasi pascatranslasi, serta mendukung proses produksi yang relatif lebih cepat dan ekonomis. Meskipun demikian, konstruksi dan transformasi gen HA dari galur H5N1 lokal Indonesia ke dalam sistem ekspresi Pichia pastoris masih terbatas. Penelitian ini bertujuan mengonstruksi vektor ekspresi pPICZ?A yang membawa gen HA dari HPAIV galur A/Indonesia/5/2005 (H5N1) clade 2.1, menghasilkan kaset ekspresi linear, serta memperoleh kandidat transforman Pichia pastoris. Konstruksi vektor dilakukan menggunakan metode Gibson Assembly, kemudian diverifikasi melalui transformasi ke Escherichia coli Top10, PCR koloni, dan analisis sekuensing DNA. Selanjutnya, kaset ekspresi linear diperoleh melalui amplifikasi PCR dan ditransformasikan ke Pichia pastoris menggunakan metode elektroporasi dengan beberapa variasi kondisi transformasi. Gen HA berukuran 1.530 bp berhasil dikonstruksi ke dalam vektor pPICZ?A berukuran 3.481 bp sehingga menghasilkan konstruk rekombinan berukuran 5.011 bp. Plasmid rekombinan pPICZ?A-HA berhasil diverifikasi melalui PCR koloni dan analisis sekuensing. Kaset ekspresi linear berukuran 5.011 bp berhasil diperoleh melalui PCR dan ditransformasikan ke Pichia pastoris. Kandidat transforman yang resisten terhadap Zeocin berhasil diperoleh pada kondisi elektroporasi menggunakan 200 ng DNA linear dengan tegangan 1150 V, kapasitansi 10 ?F, dan resistansi 600 ?. Hasil penelitian menunjukkan bahwa vektor ekspresi rekombinan pPICZ?A-HA berhasil dikonstruksi dan kandidat transforman Pichia pastoris berhasil diperoleh. Hasil ini menjadi dasar bagi penelitian lanjutan mengenai integrasi kaset ekspresi dan produksi protein HA rekombinan untuk mendukung pengembangan vaksin H5N1 yang sesuai dengan galur virus yang beredar di Indonesia.