Perpustakaan Digital ITB

Karbonat anhidrase (KA) adalah enzim yang mengkatalisis konversi karbon dioksida (CO2) menjadi bikarbonat (HCO3–), berperan dalam transpor CO2 dan keseimbangan pH darah, serta banyak ditemukan di sitosol sel darah merah (SDM). Penelitian ini bertujuan untuk mengisolasi, memurnikan, dan menguji aktivitas KA dari SDM manusia dalam hidrasi CO2. Isolasi dilakukan melalui sonikasi SDM dalam bufer hipotonik, diikuti pemisahan KA dari hemoglobin (Hb) dengan presipitasi amonium sulfat atau ekstraksi pelarut organik, serta pemurnian lanjutan menggunakan kromatografi penukar anion. Analisis dilakukan dengan SDS-PAGE, uji aktivitas berdasarkan perubahan pH, dan uji kinetika enzim. Hasil penelitian menunjukkan bahwa SDM yang awalnya berwarna merah kecokelatan berubah menjadi merah setelah dipecah, mengindikasikan Hb telah keluar dari sel. Presipitasi amonium sulfat tidak dapat memisahkan KA dan Hb. Namun, keduanya terpisah dengan baik menggunakan pelarut etanol:klorofom (4:6). KA dan Hb berturut-turut diidentifikasi dengan massa molekul ~29 kDa dan ~15 kDa. Aktivitas spesifik KA dari fraksi etanol:kloroform (4:6) adalah 478 U/mg, perolehan 74,6%, dan kelipatan pemurnian 32. Pemurnian lanjutan melalui kolom HiTrap Q HP menghasilkan empat fraksi protein, dengan fraksi pertama menunjukkan aktivitas spesifik tertinggi sebesar 1172 U/mg, perolehan 60,4%, dan kelipatan pemurnian 80. Uji kinetika fraksi puncak pertama memberikan hasil konstanta Michaelis-Menten (KM) 0,0064 M, nilai kcat 4,90 × 10? s–¹, dan efisiensi katalitik (kcat/KM) 7,65 × 10? M–¹·s–¹. Hasil ini menunjukkan bahwa KA dari SDM manusia dapat dimurnikan secara efektif melalui kombinasi ekstraksi pelarut etanol:kloroform (4:6) dan kolom HiTrap Q HP dan memiliki aktivitas tinggi dalam mengkatalisis hidrasi CO2.