Perpustakaan Digital ITB

ABSTRAK: Enzim penisilin asilase (EC 3.5.1.11) adalah enzim yang mengkatalisis reaksi hidrolisis rantai samping dari penisilin nenjadi asam 6-aminopenisilanat (6-APA) dan asam karboksilat. Beberapa mikroorganisne menghasilkan enzim penisilin asilase secara intrasel maupun ekstrasel. 6-APA nerupakan inti penisilin dan dapat dipakai sebagai bahan dasar untuk penbuatan penisilin senisintetik. Dalam penelitian ini enzim penisilin G asilase diisolasi dari bakteri Escherichia coli B-130 yang ditumbuhkan dalam medium Morita dan Iwata, yang menggunakan 0,2% asam fenilasetat sebagai induser. E.coli. memproduksi enzim penisilin asilase secara intraselluler, oleh karena itu untuk nengisolasi enzim ini diperlukan pemecahan sel dengan menggunakan Homogenisator Potter Elvehjen dan Ultrasonikator. Ekstrak enzim kasar dimurnikan secara pengendapan dengan menggunakan amonium sulfat dan dilanjutkan dengan kolom kromatografi penukar anion DEAE-sephacei. Aktivitas enzim penisilin G-asilase ditentukan dengan metode yang berdasarkan pada penbentukan turunan 2.4 pentanadion dengan 6-APA, yang diikuti reaksi kedua dengan p-dimetilaminobenzaldehida (Reagen Erlich), akan membentuk warna merah yang menyerap warna pada X 538 nn. Lama inkubasi 30 menit dan konsentrasi substrat bensilpenisilin 10 mg/ml. Enzim penisilin G asilase yang diperoleh mempunyai pH optimum 7,5 dan temperatur optimum 55 derajat C. Tetapan Michaelis-Menten dan kecepatan maksimum dari penbentukan 6-APA, berturut-turut adalah 0,86 pH. dan 147 pmol/mL enzin/30 menit. Pemurnian enzim dengan amonium sulfat menghasilkan aktivitas spesifik sebesar 3,88 Unit/mg protein. Pada penurnian lebih lanjut lewat kolom kromatografi penukar anion DEAE-sephacel pada pH 7,8 diperoleh pemisahan enzim dengan kenurnian tinggi berdasarkan pada hasil analisis secara elektroforesis. Aktivitas spesifiknya sebesar 70,10 Unit/mg protein. Uji homogenitas enzim secara elektroforesis gel poliakrilamida menunjukkan bahwa enzim kasar menghasilkan 14 pita protein. Setelah enzim kasar dimurnikan dengan pengendapan (NH4 dan dilanjutkan dengan kolon kromatografi penukar anion DEAE-sephacel, jumlah pita protein yang diperoleh berkurang menjadi 12 pita dan 4 pita. Randemen fraksi DEAE-sephacel sebesar 39,10 X.