Perpustakaan Digital ITB

Rhodotorula toruloides merupakan ragi oleaginous yang berpotensi menjadi microbial cell factory untuk produksi bioproduk yang relevan dalam industri. Elektrotransformasi merupakan metode transformasi yang telah dikembangkan sebagai tool rekayasa genetika R. toruloides dengan metode yang simpel dan berefisiensi transformasi tinggi. Pada penelitian sebelumnya telah dikembangkan metode elektrotransformasi R. toruloides lokal, namun marka seleksi Sh Ble yang digunakan tidak efektif dalam menyeleksi karena zeocin tidak memiliki MIC yang tidak konsisten terhadap R. toruloides lokal. Higromisin telah dikonfirmasi konsisten dalam menyeleksi R. toruloides lokal sehingga digunakan untuk seleksi. Penelitian ini bertujuan untuk menentukan keberhasilan elektrotransformasi R. toruloides dengan insert plasmid pJET yang membawa kaset ekspresi gen resistensi higromisin dengan metode yang sudah dikembangkan. Ditentukan pula efek bentuk insert berupa plasmid ter-linearisasi dan plasmid sirkular. Hasil seleksi transformasi, memberikan 2 koloni dari variasi insert linear dan 1 koloni variasi insert sirkular. Setelah konfirmasi stabilitas integran dan PCR gen HygR, didapatkan 1 koloni variasi linear dengan integran stabil dan terkonfirmasi memiliki integran gen resistensi higromisin. Berdasarkan hasil penelitian, elektrotransformasi dapat mentransformasi R. toruloides dengan insert linear dengan efisiensi transformasi 0.33 cfu/ug DNA sedangkan transformasi dengan insert sirkular tidak berhasil dilakukan. Berdasarkan penelitian ini, metode yang dikembangkan terkonfirmasi dapat digunakan untuk mentransformasi R. toruloides lokal dengan marka seleksi gen resistensi higromisin dan bisa diterapkan pada penelitian selanjutnya dalam upaya rekayasa R. toruloides lokal sebagai chassis bioproduksi berbagai feedstock industri.