Perpustakaan Digital ITB

Sistem penghantaran Twin Arginine Transloca/on (Tat) pada bakteri dapat memfasilitasi translokasi protein dalam keadaan setengah terlipat atau terlipat penuh. Jalur penghantaran protein TatAdCd yang terdapat pada Bacillus sub/lis dapat dimanfaatkan sebagai jalur penghantaran protein rekombinan yang memiliki permasalahan pelipatan di intrasel pada sel inang Escherichia coli. Pada peneli'an sebelumnya yang telah dilakukan di Laboratorium Bioteknologi Sekolah Farmasi ITB, terama' adanya mutasi pergeseran rangka pembacaan kodon pada urutan DNA yang mengkode protein TatAd. Peneli'an ini bertujuan untuk menghilangkan basa guanin penyebab mutasi pada urutan DNA yang mengkode protein TatAd dengan melakukan mutagenesis situs terarah berbasis Polymerase Chain Reac/on dan mengonfirmasi kebenarannya pada 'ngkat DNA serta protein. Plasmid pembawa gen pengkode protein TatAdCd yang mengalami mutasi disiapkan, diperbaiki mutasinya, lalu ditransformasikan ke sel inang E. coli DH5a untuk proses kloning dan dikonfirmasi kebenarannya di 'ngkat DNA. Plasmid yang sudah berhasil diperbaiki urutan DNA-nya kemudian ditransformasikan ke sel inang ekspresi E. coli BL21(DE3). Protein TatAdCd diproduksi pada skala kecil dengan induksi IPTG dan dikonfirmasi keberadaannya menggunakan SDS PAGE Tris-Trisin Pada 'ngkat DNA, plasmid berhasil terkonfirmasi kebenarannya melalui analisis migrasi, analisis pemotongan, dan analisis sekuensing urutan nukleo'da yang menunjukkan bahwa basa guanin penyebab mutasi telah berhasil dihilangkan. Hasil analisis SDS PAGE Tris-Trisin menunjukkan adanya pita protein berukuran 27,5 kDa yang diduga sebagai protein TatCd. Keberadaan protein TatAd yang secara teori's berukuran 7,4 kDa belum dapat terama' pada peneli'an ini karena pada gel SDS PAGE Tris-Trisin, protein yang berukuran kurang dari 11 kDa 'dak dapat tervisualisasi.