Dengan banyaknya penggunaan pengobatan tradisional di seluruh dunia, sediaan farmasi pada obat
herbal tradisional didasarkan pada produk bahan alam. Sehingga diperlukan adanya standardisasi
obat herbal yang ditujukan untuk memberikan efikasi yang terukur secara farmakologis dan
menjamin keamanan konsumen. Salah satu aspek standardisasi dari obat herbal yaitu penetapan
kadar senyawa marker. Penelitian ini bertujuan untuk mengembangkan metode analisis penetapan
kadar senyawa marker 6-gingerol yang terdapat dalam ekstrak jahe merah (Zingiber officinale Rosc.
var. rubrum) dengan menggunakan metode kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT) yang memenuhi
persyaratan validasi metode analisis. Metode analisis dikembangkan menggunakan metode KCKT
fase balik dimana pemisahan senyawa 6-gingerol dalam larutan sampel ekstrak jahe merah
didapatkan menggunakan kolom fase balik C18 (5 µm, 125x4 mm) dengan fase gerak berupa
campuran pelarut asetonitril dan asam format 10 mM (40:60) dengan sistem elusi isokratik pada
panjang gelombang deteksi 282 nm dan laju alir yang dijaga sebesar 1 mL/menit. Pengujian
kesesuaian sistem menunjukkan metode analisis telah memenuhi persyaratan parameter uji
kesesuaian sistem (UKS) berupa keberulangan penyuntikkan, faktor simetri, faktor retensi, jumlah
lempeng teoritis, dan resolusi. Metode yang telah dikambangkan divalidasi berdasarkan guideline
yang dikeluarkan oleh ICH dan AOAC untuk spesifisitas, linearitas, akurasi, presisi, dan
ketegarannya. Pengujian linearitas menunjukkan hubungan linear yang baik (R2 = 0,9993 dan VXO =
1,601) pada rentang konsetrasi 25 hingga 125 µg/mL. Batas deteksi yang ditemukan yaitu sebesar
3,96 µg/mL dan batas kuantitasi sebesar 12 µg/mL. Pengujian akurasi menunjukkan peroleh
kembali senyawa 6-gingerol dalam sampel pada rentang 92,9% hingga 98,6%. Pengujian presisi
menunjukkan nilai simpangan baku relatif sebesar 0,986% (presisi intraday) dan 1,761% (presisi
interday). Pengujian ketegaran juga telah dilakukan terhadap perubahan komposisi fase gerak dan
laju alir yang digunakan.