Perpustakaan Digital ITB

Diabetes tipe 1 merupakan penyakit yang ditandai dengan kadar glukosa dalam darah yang tinggi akibat rendahnya produksi insulin. Pengobatan utama diabetes tipe 1 adalah injeksi hormon insulin. Untuk mempercepat waktu kerja insulin, dilakukan modifikasi terhadap urutan asam aminonya. Insulin yang telah dimodifikasi dengan cara ini disebut dengan insulin analog. Salah satu insulin analog yang telah beredar di pasaran adalah insulin aspart yang memiliki perubahan residu B28 dari prolin menjadi asam aspartat. Salah satu mikroorganisme yang dapat digunakan dalam produksi insulin adalah ragi Pichia pastoris. Ragi P. pastoris dapat memanfaatkan metanol sebagai penginduksi ekspresi protein. Salah satu galur ragi ini, yaitu P. pastoris X33 juga dapat menggunakan metanol sebagai sumber karbon satu-satunya. Penelitian ini bertujuan mengekspresikan dan memurnikan proinsulin aspart rekombinan AspS.RWR pada ragi P. pastoris X33 dalam media ekspresi Buffered Methanol-complex Medium (BMMY) dan Basal Salt Medium (BSM). Ekspresi AspS.RWR dilakukan pada P. pastoris X33 dalam media BMMY dan BSM dengan kondisi ekspresi pH 6,00 (BMMY)/5,00 (BSM); OD600 awal 60; perbandingan aerasi 4:100; dan konsentrasi metanol induksi 3% (v/v). Proinsulin aspart AspS.RWR hasil ekspresi dipekatkan dengan ultrafiltrasi dan dimurnikan dengan kromatografi penukar kation resin CM-650. Analisis SDS-PAGE menunjukkan bahwa AspS.RWR telah berhasil terekspresi dalam media BMMY dan BSM pada massa molekul sekitar 7,4 kDa, sesuai dengan literatur. Konsentrasi AspS.RWR yang diperoleh dari ekspresi dalam media BMMY adalah 0,38 mg/mL, sementara dalam media BSM konsentrasinya adalah 0,15 mg/mL. Pemurnian dilanjutkan terhadap AspS.RWR hasil ekspresi dalam media BMMY. Proinsulin aspart AspS.RWR dapat terelusi dengan baik pada elusi menggunakan buffer sitrat pH 5,00 50 mM yang mengandung NaCl sebesar 750 mM dan 1000 mM.