Perpustakaan Digital ITB

Siklodekstrin (CD) merupakan molekul oligosakarida siklik yang berbentuk silinder, bersifat hidrofobik pada bagian rongga dalam dan hidrofilik pada bagian luarnya. Di industri farmasi, CD dimanfaatkan untuk meningkatkan kelarutan atau menutupi rasa dan bau yang tidak enak dari senyawa yang bersifat hidrofob dan sesuai dengan ukuran rongga CD. CD merupakan produk reaksi enzimatis konversi pati oleh enzim siklodekstrin glikosiltransferase (CGTase). Pada umumnya terdapat tiga tipe CD yang dihasilkan dari reaksi enzimatis tersebut yaitu CD-a, 13, dan y. Jumlah pemakaian CD-3 di bidang farmasi paling tinggi dibandingkan dengan CD lainnya dengan alasan biaya produksi yang rendah dan cara produksi yang sederhana. Tujuan penelitian ini adalah mengisolasi dan memurnikan CD-r3 yang dihasilkan oleh enzim CGTase rekombinan (rCGTase) dari Bacillus sp. A2-5a serta mengkarakterisasi tingkat kemurnian dan rendemen CD-fr Enzim rCGTase diproduksi dari Escherichia coli BL2I(DE3) yang membawa plasmid plExpress_40l yang sudah disisipi gen sintetik cgtase dari Bacillus sp. A2-5a. Enzim rCGTase sebanyak 0,15 UA ditambahkan pada substrat pati sagu masak 0,5 % pada pH 6, suhu 55 °C selama 8 jam untuk menghasilkan CD-ft Isolasi dan pemumian CD-j3 dilakukan dengan dua metode. Metode pertama adalah pemurnian satu tahap yaitu dengan penambahan agen pengkompleks, sikloheksana. Metode kedua adalah pemurnian dua tahap, tahap pertama berupa isolasi CD-13 dengan kristalisasi menggunakan pelarut air dan tahap kedua pemurnian CD-13 dengan penambahan sikloheksana. Penentuan identitas, tingkat kemurnian dan rendemen CD dilakukan dengan spektrofotometri UV-vis, Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT), dan Powder X-ray Diffraction (PXRD). CD-I3 berhasil diisolasi dan dimurnikan dengan kedua metode. Metode pertama memberikan rendemen akhir CD-(3 sebesar 46,81+17,48 % dengan kemurnian 82,23+1,54 % dan rasio CD-a:13:y adalah 3:94:3. Metode kedua memberikan rendemen CD-13 sebesar 54,21+3,75 (),/0 dengan kemurnian 80,24+4,55 % dan rasio CD-a:13:y adalah 4:90:6 (tahap isolasi), sementara rendemen akhir CD-0 yaitu 6,49+1,57 % dengan kennunian 95,23+5,05 % rasio CD-a:fty adalah 2:96:2 (tahap pemurnian dengan sikloheksana). Hasil analisis dengan PXRD memberikan puncak spesifik untuk CD-f3 pada 28-- 12,62°; 22,5° dan 34,70° dan mengindikasikan bahwa kristal CD-I3 yang terbentuk dari kedua metode bet= sempurna,