ABSTRAK Ismiana Pajatiwi
PUBLIC yana mulyana COVER Ismiana Pajatiwi
PUBLIC yana mulyana BAB 1 Ismiana Pajatiwi
PUBLIC yana mulyana BAB 2 Ismiana Pajatiwi
PUBLIC yana mulyana BAB 3 Ismiana Pajatiwi
PUBLIC yana mulyana BAB 4 Ismiana Pajatiwi
PUBLIC yana mulyana BAB 5 Ismiana Pajatiwi
PUBLIC yana mulyana BAB 6 Ismiana Pajatiwi
PUBLIC yana mulyana PUSTAKA Ismiana Pajatiwi
PUBLIC yana mulyana
Superoksida dismutase mangan Staphylococcus equorum rekombinan (rMnSODSeq) adalah
enzim yang berperan dalam reaksi dismutasi radikal superoksida menjadi spesi oksigen yang
lebih stabil. rMnSODSeq memiliki rentang stabilitas termal dan pH yang cukup luas namun
aktivitasnya turun setengahnya setelah pemaparan UVC selama 45 menit. Berbagai upaya
peningkatan stabilitas protein telah berhasil dilakukan namun menghasilkan protein yang
aktivitasnya lebih rendah. Penelitian ini bertujuan untuk meningkatkan stabilitas termal
rMnSODSeq dengan tetap mempertahankan aktivitas spesifiknya. Peningkatan stabilitas
dirancang melalui pembentukan interaksi tambahan pada antarmuka dimer protein yang
tidak mengganggu pusat aktif dan bukan termasuk asam amino daerah lestari. Modifikasi
melalui mutagenesis situs terarah dengan primer yang dirancang kemudian dilakukan.
Plasmid mutan hasil mutagenesis pJExpress414_sod ditransformasi ke inang Escherichia
coli TOP10 dan BL21(DE3) berlanjut dengan overproduksi, karakterisasi dan kristalisasi
protein rMnSODSeq K38R-A121E dan K38R-A121Y. Berdasarkan pengujian stabilitas
menggunakan Thermal Shift Assay (TSA), rMnSODSeq K38R-A121E tidak menunjukkan
titik leleh dimer sehingga dihipotesiskan sebagai keberhasilan upaya peningkatan stabilitas
sedangkan rMnSODSeq K38R-A121Y mengalami penurunan stabilitas monomer. Uji
aktivitas menggunakan metode zimografi dan kolorimetri menunjukkan kesetaraan aktivitas
antara rMnSODSeq alami dan mutan. Penelitian dilanjutkan dengan berfokus pada
menentukan struktur tiga dimensi (3D) rMnSODSeq K38R-A121E dan K38R-A121Y serta
mempelajari korelasi antara struktur dan stabilitas.