Perpustakaan Digital ITB

Latar Belakang dan Tujuan: Artemisinin merupakan senyawa antimalaria yang berasal dari tanaman Artemisia annua L. dan ditemukan dalam jumlah kecil (0,01- 0,5%). Meningkatnya kebutuhan artemisinin, mendorong berbagai penelitian untuk menghasilkan senyawa ini dalam jumlah yang memadai. Salah satunya melalui teknik rekayasa genetika dengan cara overekspresi gen-gen yang berperan dalam jalur biosintesis artemisinin. Ada lima gen kunci dalam biosintesis artemisinin, salah satunya adalah cyp71AV1 yang mengkode enzim cytochrome P450 monooxygenase. Pada penelitian ini dilakukan konstruksi gen cyp71AV1 pada plasmid pCAMBIA 1303 dan transformasi secara transien ke tanaman A. annua L. Tujuan penelitian adalah untuk memperoleh plasmid rekombinan pCAMBIA 1303- cyp71AV1 dan melihat pengaruh cyp71AV1 rekombinan terhadap kandungan artemisinin. Metode: Penyisipan gen cyp71AV1 pada pCAMBIA 1303 menggunakan metode restriksi dan ligasi. Konfirmasi kebenaran plasmid rekombinan dilakukan dengan analisis migrasi, produk PCR, analisis restriksi, dan sekuensing. Plasmid rekombinan yang telah terkonfirmasi selanjutnya ditransformasi ke Agrobacterium tumefaciens AGL1 yang akan mentransfer gen cyp71AV1 ke A. annua L. Transformasi ke A. annua L. menggunakan metode vakum infiltrasi selama 45 menit dan dikofirmasi melalui uji histokimia GUS dan analisis PCR DNA genomik tanaman transforman. Hasil: Penyisipan gen cyp71AV1 pada pCAMBIA 1303 berhasil dilakukan. Konfirmasi kebenaran plasmid dengan analisis migrasi menunjukkan bahwa plasmid rekombinan bermigrasi lebih lambat dibanding plasmid kontrol pada agarosa 0,65%. Analisis produk PCR menunjukkan pita berukuran ±1500 pb yang sesuai ukuran gen cyp71AV1. Hasil pemotongan dengan enzim BglII dan SpeI menunjukkan pita berukuran ±1500 pb (insert) dan ±12000 pb (backbone). Pensejajaran urutan DNA hasil sekuensing dengan database NCBI menunjukkan hasil positif. Analisis PCR DNA genomik menunjukkan keberadaan gen cyp71AV1 rekombinan pada daun transforman. Ekspresi gen GUS yang terhubung dengan cyp71AV1 terlihat dari warna biru yang dihasilkan dengan luas area 97,6%. Kesimpulan: Konstruksi pCAMBIA 1303-cyp71AV1 dan transformasi ke A. annua L. telah berhasil dilakukan. Namun efek ekspresi terhadap peningkatan kandungan artemisinin belum dapat dipastikan.