Perpustakaan Digital ITB

Artemisinin merupakan metabolit sekunder Artemisia annua L. yang berkhasiat sebagai antimalaria. Rendahnya kadar senyawa artemisinin dalam A. annua membuat pengobatan malaria berbasis artemisinin menjadi relatif mahal. Salah satu strategi untuk meningkatkan kadar senyawa artemisinin adalah dengan rekayasa genetik tumbuhan dengan memanfaatkan gen pada jalur biosintesis artemisinin. Penelitian ini bertujuan untuk memperoleh plasmid pCAMBIA-fps dan mengamati ekspresi gen fps pada daun A. annua L. (wild type). Enzim farnesyl pyrophosphate synthase (fps) merupakan salah satu enzim penting pada jalur biosintesis artemisinin. Gen pengkode enzim fps akan ditransformasikan secara transien ke daun A. annua L. untuk meningkatkan kadar artemisinin. Untuk dapat ditransformasikan ke dalam tanaman, gen pengkode fps harus disisipkan dalam vektor biner pCAMBIA 1303. Gen fps yang digunakan adalah gen sintetik yang telah berada dalam vektor kloning pUC57. Plasmid pUC57-fps dan plasmid pCAMBIA 1303 dipotong dengan enzim restriksi SpeI dan NcoI. Konstruksi dilakukan dengan meligasikan kedua fragmen DNA yang telah terpotong dan selanjutnya ditransformasikan pada bakteri Escherichia coli DH5?. Plasmid pCAMBIA-fps ditransformasi ke dalam daun A. annua L. dengan mediasi Agrobacterium tumefaciens AGL1. Transformasi transien dilakukan dengan metode infiltrasi vakum. Hasil penelitian menunjukkan bahwa plasmid pCAMBIA-fps telah berhasil dikonstruksi yang dikonfirmasi dengan analisis migrasi, analisis produk PCR dengan primer forward CaMV dan primer reverse GUS yang memberikan produk berukuran 1655 bp, analisis restriksi dengan enzin SacI dan NheI yang memberikan 3 pita berukuran 3442, 4369, dan 5577 bp, serta penentuan urutan nukleotida dengan kesesuaian identitas 100% dengan data GenBank. Gen fps dalam plasmid pCAMBIA-fps telah berhasil ditransformasi ke dalam daun A. annua L. dengan metode infiltrasi vakum dan telah dikonfirmasi melalui uji histokimia GUS dan produk PCR dengan menggunakan primer forward CaMV dan primer reverse GUS produk PCR dengan ukuran 1655 bp.