Perpustakaan Digital ITB

Lipase (EC 3.1.1.3) adalah suatu enzim yang memiliki kemampuan mengkatalisis reaksi hidrolisis dan sintesis triasilgliserol. Lipase dari isolat Staphylococcus WL1 (LipFWS) memiliki kemampuan mengkatalisis reaksi transesterifikasi pengubahan minyak kelapa sawit menjadi biodiesel. Karakteristik LipFWS dengan nilai KM 9,8 mM dan aktivitas optimum pada 55 ?C dan pH 7 cocok untuk diaplikasikan pada industri biodiesel. Pada penelitian sebelumnya, gen pengode lipase dari Staphylococcus WL1 (lipFWS) telah diidentifikasi. Berdasarkan informasi tersebut, produksi LipFWS dalam jumlah berlimpah melalui pendekatan teknologi ekspresi tinggi sangat penting untuk diteliti. Oleh karena itu penelitian ini bertujuan mengkonstruksi dan mengekspresikan LipFWS rekombinan secara ekstra sel dan intra sel. Metode yang digunakan meliputi perancangan primer spesifik dan amplifikasi lipFWS dengan teknik PCR, kloning fragmen DNA hasil PCR di dalam vektor ekspresi pMM1525 dan pET-30a, ekspresi pMM-lipFWS dalam sel inang Bacillus megaterium MS941 dan pET-lipFWS dalam sel inang Escherichia coli BL21 (DE3), analisis in silico konstruksi pMM-lipFWS dan pET- lipFWS, dan karakterisasi LipFWS rekombinan yang dihasilkan. Hasil penelitian menunjukkan bahwa fragmen lipFWS dengan ukuran 2.200 dan 1.200 pb masing-masing untuk konstruksi dalam pMM1525 dan pET-30a berhasil diperoleh. Fragmen prolipFWS yang mengandung sisi pengenalan SacI dan BglII disisipkan ke dalam pMM1525, dan fragmen lipFWS matang dengan tambahan sisi pengenalan EcoRI dan HindIII dimasukkan ke dalam pET-30a. Konstruksi pMM-lipFWS berukuran 9.600 pb. Analisis pemotongan pMM-lipFWS dengan enzim restriksi SacI dan BglII menunjukkan adanya fragmen pMM sebesar 7.400 pb dan fragmen lipFWS sebesar 2.200 pb yang mengindikasikan bahwa lipFWS telah berhasil dikonstruksi di dalam pMM1525. LipFWS rekombinan yang dideduksi tersusun atas 723 residu asam amino dengan Mr sekira 81,143 kDa. Sel inang Bacillus megaterium MS941 yang membawa pMM-lipFWS berhasil mengekspresikan LipFWS dengan ukuran protein sekira 45 kDa secara ekstra sel. Ukuran protein yang diekspresi lebih kecil akibat aktivitas proteolitik selama LipFWS disekresi. Di sisi lain, fragmen lipFWS yang disisipkan dalam vektor ekspresi pET-30a menghasilkan konstruksi pET-lipFWS dengan ukuran 6.600 pb. Analisis pemotongan pET-lipFWS dengan EcoRI dan HindIII menunjukkan fragmen pET sebesar 5.400 pb dan fragmen lipFWS matang sebesar 1.200 pb yang mengindikasikan bahwa lipFWS telah berhasil dikonstruksi di dalam pET-30a. Residu asam amino LipFWS yang dideduksi sudah tepat, terdiri dari 442 residu dengan massa molekul relatif 49,7 kDa. Hal ini ditunjukkan pula dengan pita SDS-PAGE sekira 49,7 kDa yang mengonfirmasi ekspresi LipFWS rekombinan. Aktivitas lipase rekombinan tersebut sebesar 0,327 U/mg.