Perpustakaan Digital ITB

Penyakit kardiovaskular terutama serangan jantung dan stroke merupakan penyakit penyebab kematian utama secara global. Salah satu strategi pengobatan yang efektif untuk menangani penyakit tersebut yaitu menggunakan senyawa trombolitik berupa protein terapeutik yang tergolong dalam aktivator plasminogen atau protein mirip plasmin. Saat ini, terdapat sejumlah senyawa trombolitik yang diproduksi menggunakan teknik DNA rekombinan. Dalam teknik DNA rekombinan, bagian promotor pada kaset ekspresi plasmid rekombinan berperan penting dalam proses transkripsi dan selanjutnya dapat mempengaruhi jumlah dan bentuk protein yang terekspresi. Promotor dps merupakan salah satu jenis promotor autoinduksi yang dapat bekerja di bawah kontrol metabolik sel inang. Penggunaan promotor autoinduksi memberikan keuntungan terutama dari segi penanganan kultur dan biaya produksi protein. Berdasarkan kekuatannya, promotor dps tergolong pada promotor lemah. Promotor lemah menghasilkan protein lebih lambat sehingga pelipatan protein dapat terjadi secara lebih terkendali. Hal ini memungkinkan fraksi protein terlarut didapatkan lebih banyak dibandingkan dengan penggunaan promotor kuat. Penelitian ini bertujuan untuk menentukan pengaruh promotor dps terhadap produksi protein trombolitik dengan cara melakukan konstruksi plasmid pCAD2_DFEG169A dan mengevaluasi produksi protein reteplase dan protein Douchi Fibrinolytic Enzyme (DFEG169A) menggunakan plasmid pCAD2_ret dan pCAD2_DFEG169A yang mengandung promotor dps di Escherichia coli. Pada penelitian ini, konstruksi plasmid pCAD2_DFEG169A telah berhasil dilakukan berdasarkan konfirmasi dengan analisis migrasi dan analisis pemotongan menggunakan elektroforesis gel agarosa. Produksi reteplase dan DFEG169A dilakukan dengan mengkultur E. coli yang membawa masing-masing plasmid pada media LB 37?C selama 24 jam. Hasil overproduksi protein yang dianalisis dengan SDS-PAGE tidak memberikan pita tebal pada ukuran reteplase (39,6 kDa) dan DFEG169A (28 kDa). Dengan demikian promotor dps tidak dapat digunakan untuk memproduksi protein reteplase pada E. coli DH5?dan E. coli Rosetta-gami serta DFEG169A pada E. coli TOP10 pada sistem ekspresi dan kondisi produksi yang telah digunakan.