Diabetes melitus (DM) adalah salah satu penyakit metabolik yang kronik ditandai dengan adanya peningkatan kadar glukosa darah melewati batas normal. Enzim ?-glukosidase (EAG) memiliki peran sebagai pengkatalis proses pemecahan polisakarida menjadi monosakarida, sehingga inhibitor dari aktivitas EAG menjadi salah satu terapi pengobatan terhadap pasien penderita DM tipe II. Daun eukaliptus lemon (Corymbia citriodora (Hook.) K.D. Hill & L.A.S. Johnson), daun kayu putih (Melaleuca leucadendra (L.) L.), dan kuncup cengkeh (Syzygium aromaticum (L.) Merr. & L.M. Perry) berpotensi menjadi inhibitor dari EAG dalam upaya menurunkan kadar glukosa darah. Pengujian ini bertujuan untuk menentukan potensi penghambatan ekstrak dan fraksi dari ketiga sampel tersebut terhadap EAG. Pengujian aktivitas inhibisi EAG dilakukan secara in vitro dengan microplate assay dan diukur absorbansinya pada panjang gelombang 405 nm. Ekstraksi sampel dilakukan dengan metode maserasi menggunakan pelarut etanol 70% kemudian ekstrak terpilih dilanjutkan ke proses fraksinasi dengan metode ekstrak cair-cair (ECC) menggunakan pelarut bertingkat yaitu n-heksana dan etil asetat. Akarbosa sebagai kontrol positif pada pengujian inhibisi EAG ini memiliki IC50 sebesar 83,94 ± 7,24 ?g/mL. Nilai IC50 dari ekstrak etanol daun eukaliptus lemon, daun kayu putih, dan kuncup cengkeh secara berturut-turut adalah 4,45 ± 0,24 ?g/mL; 9,20 ± 1,14 ?g/mL; dan 9,44 ± 0,48 ?g/mL. Fraksinasi dilakukan pada ekstrak terpilih yaitu daun eukaliptus lemon dan menghasilkan IC50 dari fraksi etil asetat dan fraksi air secara berturut-turut sebesar 8,29 ± 0,31 ?g/mL dan 4,99 ± 0,37 ?g/mL. Secara umum, ekstrak etanol daun eucalyptus lemon, daun kayu putih, kuncup cengkeh serta fraksi etil asetat dan fraksi air dari ekstrak etanol daun eucalyptus lemon memiliki aktivitas inhibisi EAG yang kuat sehingga berpotensi dikembangkan sebagai antidiabetes. Apabila ditinjau dari keseluruhan hasil pengujian aktivitas inhibisi EAG, nilai IC50 yang paling baik ditunjukkan oleh ekstrak etanol daun eukaliptus lemon serta fraksi air dari daun eukaliptus lemon.