Perpustakaan Digital ITB

Siklodekstrin (CD) merupakan suatu molekul oligosakarida siklis yang tersusun dari 6, 7 dan 8 unit gula yang berturut-turut disebut sebagai CD ?, ?, dan ?. CD dapat diproduksi dengan reaksi enzimatik yang dikatalisis oleh CD glikosiltransferase (CGTase) melalui pembentukan ikatan ?-1,4 glikosidik. Meningkatnya kebutuhan CD dalam industri memicu upaya ekspresi CGTase rekombinan di Escherichia coli. Pada penelitian ini, rCGTase yang diekspresikan dari gen sintetik telah berhasil dioptimasi produksinya menggunakan dua jenis sel inang, berbagai konsentrasi IPTG sebagai penginduksi dan suhu inkubasi pasca induksi. Perolehan rCGTase paling tinggi diperoleh pada Escherichia coli BL21(DE3) dengan induksi IPTG 0,1 mM. Peningkatan jumlah rCGTase terlarut diperoleh dengan menurunkan suhu inkubasi pada 25 °C. rCGTase berukuran 76 kDa dan telah berhasil dimurnikan menggunakan kolom afinitas nikel dengan konsentrasi imidazol bertingkat untuk memisahkannya dari protein pengotor. Perolehan kembali rCGTase setelah dimurnikan sebesar 7,79% dari total protein terlarutnya. Protein tersebut terbukti aktif untuk siklisasi-?dan hidrolisis pati melalui metode zymografi. Aktivitas siklisasi-?menggunakan substrat terpregelatinasi dua kali lebih tinggi dibandingkan aktivitas tanpa pregelatinasi, suhu optimum reaksi adalah 55 °C dan T50 enzim ini adalah 62 °C. Sagu adalah substrat yang memberi aktivitas tertinggi pada pengujian menggunakan media Horikoshi. Rasio siklisasinya untuk CD diukur menggunakan kromatigrafi cair kinerja tinggi dan memberikan hasil rasio siklisasi untuk ?, ?, dan ?siklodekstrin adalah 5: 80:15 pada kondisi substrat terpregelatinasi dan 6:81:13 pada kondisi substrat tanpa pregelatinasi. Kinetika reaksi rCGTase diukur berdasarkan aktivitas siklisasi-?. Nilai Vmax, Km dan Kcat berturut-turut adalah 19,23 mg CD-?/mg CGTase/min; 7,347 mg/ml; 1105,17/detik dan efisiensinya (Kcat/Km) adalah 150,42.