Perpustakaan Digital ITB

Katalase merupakan salah satu enzim antioksidan dengan perannya mengkatalisis reaksi reduksi senyawa hidrogen peroksida menjadi oksigen dan air. Katalase hidroperoksidase II (HPII) termasuk salah satu katalase monofungsional yang tidak memiliki aktivitas peroksidase. Penelitian ini bertujuan untuk melakukan karakterisasi hasil proses overproduksi enzim katalase HPII rekombinan pada Escherichia coli BL21(DE3) berdasarkan prosedur hasil penelitian di Laboratorium Bioteknologi Farmasi Sekolah Farmasi ITB, serta melakukan purifikasi protein tersebut. Bakteri E. coli BL21(DE3) sebelumnya telah disisipkan plasmid yang membawa gen katalase HPII dan dilakukan overproduksi dengan ko-ekspresi sistem chaperone pG-Tf2 untuk meningkatkan kelarutan protein. Karakter dari sistem overproduksi dilihat melalui jumlah pelet sel, jumlah protein total, dan jumlah katalase HPII yang dihasilkan. Pemurnian dilakukan dengan kromotografi afinitas Ni-NTA dan presipitasi amonium sulfat pada rentang saturasi 30-70%. Aktivitas katalase dianalisa dengan uji gelembung dan uji kolorimetri. Sistem overproduksi menghasilkan katalase HPII terlarut, berat pelet sel, dan protein total berturut-turut adalah 0,27 - 2,51 mg; 1,1 – 1,89 g; dan 24,8 – 56,1 mg/mL. Sedangkan dengan dilakukannya ko-ekspresi chaperone pG-Tf2 katalase terlarut, berat pelet sel, dan protein total berturut-turut adalah 1,75 - 7,35 mg; 1,35 – 1,43 g; dan 35,5 – 96,6 mg/mL. Kolom afinitas Ni-NTA tidak dapat memurnikan katalase HPII pada penelitian ini. Presipitasi amonium sulfat berhasil mengurangi protein lain walau belum sempurna (partially purified). Aktivitas katalase terbesar ditemukan pada saturasi amonium sulfat 50% untuk overproduksi tanpa ko-ekspresi chaperone dan pada saturasi 40% pada overproduksi ko-ekspresi chaperone. Sistem ko-ekspresi chaperone didapati mengurangi aktivitas katalase HPII.