Perpustakaan Digital ITB

Coronmtirus Disease (COYID- 1 9) merupakan penyakit yang disebabkan oleh virus SARS-CoV-2 yang menginfeksi pernapasan rnasusia. Salah satu upayayang efektif untuk mencegah penyebaran COVID-I9 adalah dengan melakukan vaksinasi. Vaksin berbasis protein rekombinan berpotensi dan telah banyak dikembangkan karena lebih aman dibandingkan jenis vaksin lainnnya Salah satu bagian protein SARS-CoV-Zyang banyak dikembangkan sebagai kandidat vaksin adalah protein receptor binding domain (RBD) yang berinteraksi langsung dengan reseptor sel inang. Pada penelitian ini, sekuen RBD dengan duajenis mutasi yang diamati pada semuajenis varian SARS-CoV-2 (8484K dan N50 lY) difusi dengan sekuen protein foldon untuk menghasilkan trimer RBD-Foldon sehingga memiliki imunogenisitas tinggi. Tujuan khusus penelitian ini adalah mengkonstruksi gen pengkode RBDFoldon yang membawa mutasi B+84K dan N501Y. Untuk mencapai tujuan penelitian, gen pengkode RBD-Foldon diubah nukleotida pengkode asam amino pada posisi 484 dan 501 dengan metode mutasi terarah menggunakan teknik Polymerase Chain Reaction (PCR). Mutan RBD-Foldon yang terdapat dalam plasmid pPICZaA-RBD-F kemudian diintegrasikan pada genom rugi Pichia pastoris- Tahap selanjutnya adalah mengekspresikan protein RBD-Foldon dalam sel P. pastaris. Mutasi E484K dan N50lY RBD-Foldon dikonfirmasi melalui penentuan urutan basa nukleotida menggunakan metode dideoksi Sanger, dimana nukleotida yang mengkode asam glutamat pada 484 diubah menjadi lisin dan asparagin pada posisi 501 telah berhasil diubah menjadi tirosin. Kemampuan P. pastoris tumbuh pada media yang mengandung zeosin menunjukkan bahwa genom P. pastoris tslah terintegrasi plasmid mutail pPICZuA-RBD-F. Munculnya pita DNA yang berukuran 1,3 kb melalui teknik PCR koloni mengkonfirmasi bahwa gen mutan RBD-Foldon tel*r terintegrasi pada genom P- pastoris. Analisis protein ekstraseluler P. pastoris menggunakan elektroforesis gel akrilamid (SDS-PAGE) menunjukkan pita protein dengan rnassa molekul -73 kDa. Ukuran tersebut sesuai dengan massa molekul trimer RBD-Foldon. Oleh karena it& protein RBD-Foldon yang membawa mutasi E484K dan N501Y telah berhasil diekspresikan pada Ppastoris. Kedua molekul RBD-E484K-Foldon dan RBD-N50 I Y-Foldon menjadi msdal dasar unhrk mengembangkan vaksin COVID-I9 berbasis protein.