Perpustakaan Digital ITB

a-Amilase (EC 3.2.1.1) tergolong keluarga 13 glikosil hidrolase yang memutuskan ikatan a-1,4 glikosidik pada pati. Penelitian ini bertujuan mengidentifikasi bakteri laut khas Indonesia penghasil a-amilase dengan mengkarakterisasi a-amilase yang dihasilkannya. Identifikasi mikroba didasarkan atas metode gen pengode 16S rRNA dengan teknik PCR menggunakan primer mundur (UniB1) 5'-GGTTAC(G/C)TTTGTTACGACTT-3' dan primer maju (BactF1) 5'-AGAGTTTGATC(A/C)TGGCTCAG-3'. Enzim yang telah dimurnikan parsial, aktifitasnya dideteksi dengan metode Fuwa dan pola kerja enzim dianalisis dengan kromatografi lapis tipis. Berat molekul ditentukan lewat teknik SDS-PAGE dan zimografi. Hasil percobaan menunjukkan bahwa urutan gen pengode 16S rRNA bakteri laut yang diteliti memiliki kekerabatan paling dekat dengan Bacillus amyloliquefaciens strain GH58 dengan kemiripan urutan gen pengode 16S rRNA sebesar 99%. Hasil pemurnian dengan kolom Resource-Q menghasilkan dua puncak yang memiliki aktifitas a-amilase. Puncak pertama memiliki aktifitas spesifik 88,46 U/mg, rendemen 27,87%, dan kelipatan kemurnian 1,4. Puncak ke dua memiliki aktifitas spesifik 247,52 U/mg, rendemen 22,6%, dan kelipatan kemurnian 3,91. Kedua puncak memiliki karakteristik yang sama, dengan mode kerja endo dan menghasilkan 3 pita amilase dengan berat molekul 97 kDa, 55 kDa, dan 45 kDa. Analisis SDS-PAGE dan native-PAGE mengindikasikan bahwa enzim terbentuk atas multisubunit.