Perpustakaan Digital ITB

Abstrak. Gen mutan D802N DNA Pol I ITB-1 telah dikonstruksi dan diekspresi secara heterolog di Escherichia coli. Ekstrak enzim kasar dari mutan ini telah dikarakterisasi dan menunjukkan adanya perbedaan sifat dibanding dengan ekstrak enzim kasar dari protein wild-type. pH dan suhu optimum enzim mutan berturut-turut adalah 9,0 dan 50 derajat C; Sedangkan enzim wild-type 7,4 dan 65 derajat C. Perubahan kondisi optimum ini menyebabkan turunnya aktivitas spesifik enzim mutan hingga 2,7 kali , yaitu dari 3,71 unit/mg protein untuk enzim wild-type menjadi 1,34 unit/mg protein untuk enzim mutan. Hal yang sama terjadi pada penentuan nilai Km dan Vmaks terhadap substrat (dNTP), sehingga effisiensi katalitik (kcat/Km) enzim mutan menurun kurang lebih 2 kali dibanding enzim wild-type. Mutasi D802N pada gen penyandi DNA Pol I ITB-1 menyebabkan afinitas enzim-substrat berkurang sehingga aktivitas enzim menurun dan enzim menjadi kurang stabil.