digilib@itb.ac.id +62 812 2508 8800

EKSPRESI GEN bglp15.2 YANG MEMBAWA SINYAL PEPTIDA INULINASE PADA Saccharomyces cerevisiae BY4741 UNTUK MENGHASILKAN β-GLUKOSIDASE EKSTRASELULER

Penulis : ARMAYA BADI'ATUL FITRI (NIM: 21115003)
Kontributor / Dosen Pembimbing :
  • Pembimbing : Dr. Elvi Restiawaty. Dr. Maelita R. Moeis.
Jenis Koleksi : Tesis
Penerbit : Bioteknologi
Fakultas : Sekolah Ilmu dan Teknologi Hayati
Subjek :
Kata Kunci : kloning, ekspresi, sinyal peptida, β-glukosidase, aktivitas enzim, ekstraseluler
Sumber :
Staf Input/Edit : Alice Diniarti   Alice Diniarti
File : 1 file
Tanggal Input : 29 Sep 2017

Salah satu enzim yang penting dalam kompleks enzim selulase adalah β-glukosidase yang mengkatalisis reaksi perubahan selobiosa menjadi glukosa. Pada penelitian ini, dilakukan penambahan sinyal peptida gen inulinase Kluyveromyces marxianus, kloning, dan ekspresi gen bglp15.2 pada S. cerevisiae BY4741. Gen bglp15.2 merupakan penyandi β-glukosidase dan berasal dari metagenom sampel air dan sedimen laut dalam Kepulauan Kawio, Sulawesi Utara. Gen bglp15.2 memiliki kemiripan sebesar 90% dengan sekuens nukleotida bakteri Shewanella frigidimarina NCIMB 400 (Acc.: CP000447.1). Penambahan sinyal peptida dimaksudkan untuk mensekresikan protein β-glukosidase dan dilakukan dengan menggunakan metode PCR (Polymerase Chain Reaction). Gen bglp15.2 dan bglp15.2INU (gen bglp15.2 yang membawa sinyal peptida) dikloning pada Escherichia coli DH5α dengan menggunakan vektor kloning pGEM-T-Easy dan shuttle vector pBEVY-GL. Pemindahan gen dari vektor pGEM-T-Easy ke dalam vektor pBEVY-GL dilakukan dengan metode restriksi dan ligasi. Shuttle vector pBEVY-GL digunakan untuk mentransformasi S. cerevisiae BY4741 dengan gen bglp15.2 dan bglp15.2INU. Transformasi S. cerevisiae BY4741 dilakukan dengan metode lithium asetat dan PEG (Polietilen Glikol) 4000 tanpa DNA carrier. Keberhasilan setiap tahapan transformasi dikonfirmasi dengan PCR koloni dengan menggunakan dua macam pasangan primer, yaitu primer universal vektor dan primer spesifik gen. Setiap PCR koloni menghasilkan amplikon yang ukurannya sesuai dengan yang diharapkan. S. cerevisiae BY4741 rekombinan yang membawa gen bglp15.2INU memiliki aktivitas enzim β-glukosidase ekstraseluler pada waktu tumbuh 48 jam (OD600 3) sebesar 0,0178 U/ml sedangkan aktivitas intraselulernya sebesar 0,0181 U/ml. Enzim Bglp15.2 yang tidak memiliki sinyal peptida tidak disekresikan dan memiliki aktivitas intraseluler sebesar 0,0079 U/ml setelah diinduksi selama 10 jam (OD600 1,5). Dengan menggunakan sinyal peptida inulinase K. marxianus, protein Bglp15.2INU tidak disekresikan seluruhnya.

Artikel Terkait