Perpustakaan Digital ITB

ABSTRAK: Telah dilakukan isolasi enzim penisilin asilase dari Escherichia coli. Penisilin asilase adalah enzim yang mengkatalisis reaksi hidrolisis penisilin menjadi asam 6-aminopenisilanat (6 APA) dan asam fenil asetat. 6-APA merupakan bahan baku untuk pembuatan penisilin semisintetik. Aktivitas spesifik ekstrak enzim kasar dari Escherichia cali yang ditumbuhkan dalam medium Morita dan Iwata dengan 0,2% asam fenil asetat sebagai zat penginduksi adalah 0,48 unit/mg protein. Setelah pemurnian dengan amonium sulfat 20 - 60%, aktivitas spesifiknya meningkat menjadi 1,06 unit/mg protein. Aktivitas enzim ditentukan berdasarkan jumlah 6-APA yang dihasilkan dari hidrolisis substrat benzil penisilin pada pH 7,5 dan suhu 45°C dengan lama inkubasi 30 menit. 6-APA yang terbentuk ditentukan berdasarkan metode Kornfeld. Kadar protein ditentukan dengan metode Lowry. Enzim hasil isolasi diamobilkan dengan menggunakan bahan pendukung k-Karagenan dan kitin. Aktivitas spesifik enzim amobil dengan bahan pendukung k-Karagenan adalah 0,87 unit/mg protein pada pH 7,5 dan suhu 45°C dengan lama inkubasi 30 menit, sedangkan dengan menggunakan bahan pendukung kitin diperoleh 0,94 unit/mg protein pada kondisi yang sama. Dari hasil karakteristik kinetika enzim diperoleh Vmaks untuk enzim bebas sebesar 0,076 umol 6 APA/menit, KM 0,655 mg/ml, KI 1,012 mg/ml dengan inhibitor asam fenil asetat 0, 5%. Untuk enzim amobil dengan bahan pendukung k-Karagenan diperoleh Vmaks 0,066 µmol 6-APA/menit dan KM 0,813 mg/ml, sedangkan dengan menggunakan bahan pendukung kitin diperoleh Vmaks 0,071 Nmol 6-APA/menit dan KM 0,765 mg/ml. Dari hasil penelitian menunjukkan bahwa enzim amobil lebih stabil dibandingkan dengan enzim bebas terhadap waktu penyimpanan pada suhu 40C dan 270C. Enzim amobil dapat digunakan secara berulang kali. Enzim penisilin asilase yang diamobilkan dengan menggunakan bahan pendukung kitin lebih stabil dibandingkan dengan k-Karagenan terhadap pemakaian berulang.