Perpustakaan Digital ITB

Siklodekstrin (CD) merupakan senyawa oligosakarida siklik yang banyak dimanfaatkan dalam bidang pangan, farmasi, dan kosmetik. Produksi CD membutuhkan enzim siklodekstrin glikosiltransferase (CGTase). Penelitian sebelumnya telah berhasil mengonstruksi gen cgtase dari isolat lokal Bacillus sp. LT1B dan PT2B ke dalam Escherichia coli BL21(DE3), namun belum mampu menghasilkan enzim rCGTase murni dalam bentuk terlarut secara optimal. Penelitian ini bertujuan untuk menentukan kondisi optimum overproduksi dan purifikasi untuk memperoleh enzim rCGTase LT1B dan PT2B murni dalam bentuk terlarut secara optimal serta menganalisis spesifisitas produk CD yang dihasilkan dan mengevaluasi potensi enzim rCGTase dalam membentuk CD-? dari beberapa jenis substrat. Optimasi kondisi overproduksi enzim rCGTase dilakukan dengan memvariasikan durasi induksi, suhu induksi, konsentrasi IPTG, dan jenis media kultur. Optimasi kondisi purifikasi enzim rCGTase dilakukan dengan kromatografi afinitas berbasis resin Ni-NTA agarosa. Analisis spesifisitas produk CD yang dihasilkan dari reaksi enzimatik rCGTase ditentukan dengan HPLC-RID. Evaluasi potensi enzim rCGTase dalam membentuk CD-? dilakukan dengan uji aktivitas siklisasi-?. Kondisi optimum overproduksi dicapai ketika induksi dilakukan dengan konsentrasi IPTG 0,3 mM pada suhu 25°C selama 24 jam dalam media LB cair. Kondisi optimum purifikasi berhasil menghasilkan enzim rCGTase murni dengan bobot molekul sebesar 84,7 kDa untuk LT1B dan 84,0 kDa untuk PT2B. Analisis spesifisitas produk CD menunjukkan bahwa kedua enzim rCGTase dominan menghasilkan CD-? dengan rasio CD-? : CD-? : CD-? sebesar 3:82:15 untuk LT1B dan 2:83:15 untuk PT2B. Kedua enzim rCGTase juga terbukti memiliki aktivitas siklisasi-? terhadap empat jenis subtrat yang diuji, yakni soluble starch, pati sagu, pati batang nanas, dan maltodekstrin batang nanas.