Perpustakaan Digital ITB

Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2) telah menginfeksi saluran pernapasan jutaan manusia dan menyebabkan pandemi global selama beberapa tahun. SARSCoV-2 masuk ke dalam sel inang melalui receptor-binding domain (RBD) yang mengikat reseptor angiotensin-converting enzyme 2 (ACE2) di permukaan sel manusia. Vaksin berbasis RBD dapat menimbulkan respon antibodi netralisasi yang kuat, menjadikannya sebagai kandidat vaksin SARS-CoV-2. Produksi RBD rekombinan (rRBD) telah dilakukan dengan sistem sel Pichia pastoris dan sel Escherichia coli. rRBD dalam P. pastoris bersifat larut dalam bufer tertentu, sedangkan E. coli menghasilkan rRBD sebagai endapan protein. Penelitian sebelumnya berhasil menunjukkan bahwa gen pengkode kitosanase (csn1) diekspresikan dengan sangat tinggi pada P. pastoris. Oleh karena itu, tujuan penelitian ini adalah mengekspresikan gen pengkode RBD yang digabungkan dengan gen csn1 dalam P. pastoris X-33. Ekspresi gabungan gen Csn1-RBD dilakukan dalam media ekspresi buffered methanol-complex medium (BMMY) dan buffered glycerol-complex medium (BMGY), dengan memvariasikan waktu produksi 3?5 hari dan konsentrasi metanol 1?3% (v/v) sebagai inducer. Protein rekombinan Kitosanase-RBD yang dihasilkan selanjutnya dimurnikan dengan kromatograsi afinitas menggunakan resin Ni-NTA agarosa. Kitosanase-RBD yang berada di dalam supernatan sel P. pastoris X-33 memiliki ukuran ~ 59 kDa berdasarkan sodium dodesil poliakrilamid gel elektroforesis (SDS-PAGE). Ukuran protein ini lebih besar dibanding ukuran teoretis, yaitu 53,7 kDa. Hasil pemurnian dengan resin Ni-NTA juga menunjukkan adanya pita yang berukuran ~ 59 kDa, tetapi ada pita-pita lain pada elektroferogram SDSPAGE. Hasil ini menunjukkan Kitosanase-RBD sudah murni sebagian. Berdasarkan aktivitas kitosanase, protein rekombinan dari koloni 23 dan 31 berturut-turut memiliki aktivitas spesifik sebesar 1,375 U/mg dan 1,701 U/mg pada konsentrasi metanol 1% (v/v) dan waktu produksi optimum di hari ke-4. Pemurnian dan pemekatan juga menunjukkan peningkatan kemurnian sebesar 5?14 kali. Hasil penelitian ini diharapkan dapat meningkatkan produksi rRBD sehingga dapat diterapkan pada berbagai aplikasi.