Perpustakaan Digital ITB

ABSTRAK: Salmonella typhimurium adalah bakteri penyebab penyakit mirip tifoid (typhoid-like disease) pada mencit. Bakteri ini digunakan sebagai sistem model untuk mempelajari penyakit tifoid pada manusia yang disebabkan oleh bakteri Salmonella typhi (Dorman and Ni Bhrian, 1993). Mekanisme patogenesis tingkat molekul S. typhi sampai saat ini masih merupakan bahan kajian yang menarik, karma belum semua gen yang bertanggung jawab terhadap patogenesis bakteri tersebut diketahui. Ada dugaan hal itu berhubungan dengan gen-gen yang hanya terekspresi secara in vivo (di dalam sel Mang) tetapi tidak secara in vitro (pada media buatan). Pada tahun 1993, kelompok Mekalanos telah membuktikan dugaan tersebut dengan menemukan lima gen ivi (in vivo-induced) Salmonella typhimurium melalui teknologi In vivo Expression Technology, sehingga dapat dibuat hipotesis bahwa mekanisme patogenesis tingkat molekul S. typhi berhubungan dengan gen-gen yang hanya terekspresi secara in vivo dan gen-gen tersebut homolog dengan gen-gen ivi S. typhimurium. Salah satu dari kelima gen ivi tersebut adalah diketahui mempunyai homologi dengan operon carAB E. coli K-12, operon untuk dua sub unit enzim karbamoil-fosfat sintetase. Pada S. typhimurium, dua subunit enzim tersebut dikode oleh gen yang ada pada lokus pyrA ((llansdorff, 1993). Informasi sebagian atau seluruh urutan nukleotida lokus pyrA akan sangat bermanfaat dalam rangka studi gen S. typhi yang hanya terekspresi secara in vivo. Tujuan penelitian ini adalah mengamp]ifikasi fragmen 618 pb DNA lokus pyrA S. typhimurium secara PCR dengan menggunakan sepasang primer CA-1 dan CA-2 yang diran.cang atas dasar urutan operon carAB E. coli K12 dart menentukan urutan nukleotida fragmen DNA basil amplifikasi tersebut setelah dilakukan kloning dengan bantuan vektor-T pMOSBlue. Sebanyak 582 urutan nukleotida telah diperoleh dari sekuensing fragmen 618 pb DNA hasil amplifikasi tersebut dengan metode dideoxy-Sanger. Dua puluh nukleotida pertama merupakan molekul primer CA-1 dan 562 nukleotida sisanya dianalisis terhadap urutan nukleotida operon carAB E. col: K12 yang ada di GenBank versi 72 dan operon carAB S. typhimurium LT2 yang ada di GenBank versi 90. Hasil analisis terhadap operon carAB E. col: menunjukkan adanya 496 nukleotida homolog, 5 nuklotida ragu-ragu, dan 61 nukleotida tidak homolog ( 42 nukleoida mengalami transisi dan 19 nukleotida mengalami transversi). Hasil analisis terhadap operon carAB S. typhimurium LT2 menunjukkan adanya 554 nukleotida homolog, 5 nukleotida ragu-ragu dan 3 nukleotida tidak homolog (2 nukleotida mengalami transisi dan 1 nukleotida mengalami transversi).