Perpustakaan Digital ITB

Lipase (triacylglycerol acylhydrolases, EC 3.1.3.3) adalah enzim lipolitik yang mengkatalisis reaksi hidrolisis maupun sintesis ester dari trigliserida pada antarmuka antara senyawa (pelarut) polar dan nonpolar. Lipase terdapat di alam dan diproduksi oleh berbagai tanaman, hewan dan mikroorganisme. Lipase memiliki kemampuan katalitik yang banyak sehingga dapat dimanfaatkan secara luas di berbagai bidang industri sebagian besar dimanfaatkan pada bidang industri bioteknologi, industri makanan, deterjen, aplikasi medis dan proses enzimatik dalam produksi bahan kimia lipofilik. Umumnya lipase yang digunakan di dunia industri berasal dari mikroorganisme prokaryotik, karena lipase yang berasal dari bakteri aktif pada rentang temperatur dan pH yang luas. Termostabilitas merupakan sifat yang diinginkan untuk lipase komersil, karena laju reaksi meningkat seiring dengan meningkatnya temperatur, sehingga produktivitas reaksi dapat ditingkatkan pada temperatur tinggi. Pengembangan lebih lanjut masih terus dilakukan dengan tujuan untuk mendapatkan sumbersumber enzim lipase yang mempunyai stabilitas spesifik tinggi pada temperatur ekstrim. Beberapa bakteri termofilik dari sampel kompos telah berhasil dikultivasi di laboratorium, salah satu isolat mikroorganisme termofilik kemudian diberi nama isolat AL17 dan dilakukan identifikasi secara 16s RNA dan dinyatakan bakteri tersebut adalah Pseudoxanthomonas sp. Pada penelitian ini telah dilakukan studi lanjut mengenai kloning dan karakterisasi gen pengkode lipase isolat bakteri Pseudoxanthomonas sp. Gen pengkode lipase telah berhasil diisolasi dari bakteri Pseudoxanthomonas sp dan disisipkan ke dalam vektor kloning pJET 1.2/blunt. Hasil penentuan urutan nukleotida menunjukkan bahwa gen lipase isolat AL17 ini memiliki ukuran sebesar 936 pasang basa dengan ATG sebagai kodon pemula dan TAA sebagai kodon henti. Gen lipase ini memiliki kemiripan 98% dengan gen lipase dari Uncultured Pseudomonas sp. (GenBank No. AKA58891.1) di tingkat protein dan memiliki kemiripan sebesar 99% dengan gen lipase dari Uncultured Pseudomonas sp. Clone LK_ITB4c (GenBank No. KP204885.1) di tingkat nukleotida. Selanjutnya dilakukan pemindahan gen pengkode lipase yang terdapat pada vektor kloning (pLipAL17-1.2) ke vektor ekspesi pET-30a(+). Gen lipase AL17 yang akan diintegrasikan dalam plasmid rekombinan pET-30a(+) ini terletak pada posisi setelah daerah promotor T7. Kerangka baca gen pengkode lipase yang terdapat pada vektor ekspresi pET-30a(+) (pLipAL17) menunjukkan bahwa protein lipase rekombinan yang diekspresikan akan mempunyai tambahan urutan asam amino yang berasal dari pET-30a(+) pada daerah N-terminal yaitu adanya 6x Histag, thrombin site, S-tag dan enterokinase site. Plasmid rekombinan selanjutnya ditransformasikan pada E.coli BL21(DE) untuk mengekspesikan protein rekombinan.