Perpustakaan Digital ITB

Protein Disulfida Isomerase (PDI) adalah enzim multifungsi yang mengkatalisis reaksi reduksi, oksidasi, dan isomerisasi ikatan disulfida. Tujuan penelitian ini adalah untuk mengindentifikasi domain-domain pada PDI ragi yang berperan dalam pengikatan substrat. PDT manusia mempunyai lima domain, yaitu domain a, b, b', a', c. Domain yang diduga sebagai tempat pengikatan substrat adalah domain b dan b'. Tiga mutan yang diduga tidak mengandung sisi pengikat substrat telah dikonstruksi dengan menggunakan metode inverted PCR. Mutan yang dikonstruksi adalah: mutan pdi l (A 109-166), mutan pdi 1(A 197-250), mutan pdi l (A 109-250). Analisis elektroforesis gel poliakrilamidanatrium dodesil sulfat (SDS-PAGE) menunjukkan bahwa ketiga mutan tidak diekspresikan dalam level tinggi, tetapi analisis western blot menunjukkan ketiga mutan pdi diekspresikan di E. col/ BL21(DE3). Ketiga mutan pdi mempunyai aktivitas mereduksi insulin hanya sekitar 11% dibandingkan wild type. Analisis Iebih lanjut pada mutan pdil (A109-166) menunjukkan bahwa level ekspresi yang rendah pada mutan pdi bukan disebabkan oleh promotor T7 yang tidak aktif