Perpustakaan Digital ITB

DNA Polimerase merupakan enzim yang mengkatalisis reaksi pembentukan ikatan fosfodiester antar deoksiribonukleotida dengan ujung 3'-OH rantai DNA. Gen DNA polimerase dari bakteri termofilik isolat somber air pangs Cimanggu telah dnsolasi dan diekspresi dalam E. coil melalui plasmid pITB6. Karakteristik biokimia DNA Polimerase rekombinan tersebut belum diketahui. Pada penelitian ini telah dilakukan analisis tingkat ekspresi dan pemurnian protein berbobot molekul 112 kDa yang diasumsikan sebagai DNA polimerase rekombinan. Tingkat ekspresi protein tersebut diamati melalui SDS-PAGE dan dianalisis dengan program densitofotometer Photocap. Analisis densitifotometer menunjukkan protein berbobot molekul 112 kDa diekspresi tinggi sebesar ± 30% dari total protein setelah diinduksi dengan triptofan selama 4 jam. Ekstrak kasar protein dimurnikan dengan pemanasan pada 60°C selama 20 menit. Supernatan basil pemanasan difraksinasi dengan menambahkan amonium sulfat pada beberapa tingkat kejenuhan. Fraksi amonium sulfat 40%-60% jenuh merupakan fraksi yang memiliki kasar protein tertinggi, yang dimurnikan lebih lanjut dengan kromatografi kolom DEAE-selulosa