Perpustakaan Digital ITB

Katalase-peroksidase (KatG) merupakan enzim homodimer bifungsional yang berperan penting dalam virulensi Mycobacterium tuberculosis karena aktivitas katalitiknya mampu mendekomposisi spesi radikal oksidatif M. tuberculosis. KatG berperan dalam pengubahan INH sebagai prodrug menjadi bentuk isonikotinoil-NAD, yaitu inhibitor biosintesis asam mikolat yang merupakan komponen utama pembentuk dinding sel M. tuberculosis dan mutasi katG diketahui berkaitan dengan resistensi Mycobacterium tuberculosis terhadap INH. KatG memiliki 2 domain dalam satu subunit, yaitu domain ujung N yang mengandung sisi pengikatan heme dan domain ujung C yang belum diketahui peran fungsionalnya hingga saat ini. Adanya delesi pada ujung C KatG diduga mengganggu kestabilan struktur KatG. Pada penelitian ini, delesi 62 residu asam amino ujung C dilakukan untuk mengetahui fungsinya pada katG. Penelitian mencakup amplifikasi fragmen katG-delta C62 dengan PCR, kloning fragmen DNA katG- delta C62 di vektor kloning pGEM-T, subkloning ke vektor ekspresi pCold, dan ekspresi katG-delta C62 di Escherichia coli BL21(DE3). Hasil analisis restriksi, analisis PCR koloni, dan analisis urutan nukleotida menunjukkan bahwa konstruksi vektor rekombinan pGEM-T dan pCold yang membawa mutan katG- delta C62 telah berhasil dilakukan. Hasil analisis SDS-PAGE menunjukkan bahwa protein katG- delta C62 berhasil diekspresikan sebagian besar dalam bentuk tidak larut dengan berat molekul yang diperkirakan 73,18 kDa. Hasil analisis pemodelan struktur katG- delta C62 menunjukkan bahwa 62 residu asam amino ujung C berperan dalam kestabilan struktur KatG melalui interaksi non ikatan di daerah antarmuka dimer.