![](https://digilib.itb.ac.id/assets/icon/pdf.gif)
NADIA ASTRI REGINA
PUBLIC Latifa Noor ![](https://digilib.itb.ac.id/assets/icon/pdf.gif)
NADIA ASTRI REGINA
EMBARGO  2027-09-04 
EMBARGO  2027-09-04 
![](https://digilib.itb.ac.id/assets/icon/pdf.gif)
NADIA ASTRI REGINA
EMBARGO  2027-09-04 
EMBARGO  2027-09-04 
![](https://digilib.itb.ac.id/assets/icon/pdf.gif)
NADIA ASTRI REGINA
EMBARGO  2027-09-04 
EMBARGO  2027-09-04 
![](https://digilib.itb.ac.id/assets/icon/pdf.gif)
NADIA ASTRI REGINA
EMBARGO  2027-09-04 
EMBARGO  2027-09-04 
![](https://digilib.itb.ac.id/assets/icon/pdf.gif)
NADIA ASTRI REGINA
EMBARGO  2027-09-04 
EMBARGO  2027-09-04 
![](https://digilib.itb.ac.id/assets/icon/pdf.gif)
NADIA ASTRI REGINA
EMBARGO  2027-09-04 
EMBARGO  2027-09-04 
![](https://digilib.itb.ac.id/assets/icon/pdf.gif)
NADIA ASTRI REGINA
EMBARGO  2027-09-04 
EMBARGO  2027-09-04 
Malaria merupakan penyakit yang disebabkan oleh parasit Plasmodium yang ditularkan
melalui gigitan nyamuk Anopheles betina. Pencegahan penyakit ini dapat dilakukan dengan
vaksin malaria yang hingga saat ini masih dalam tahap pengembangan. Plasmodium
falciparum Erythrocyte Binding Antigen-175 (PfEBA-175) merupakan salah satu target
protein yang berpotensi menjadi kandidat vaksin malaria tahap darah karena berperan dalam
pengenalan dan pengikatan terhadap reseptor permukaan eritrosit yaitu glikoporin A (GPA).
Pada gen pengkode protein tersebut terdapat beberapa region yaitu region I-VI, tetapi region
III-V menjadi kandidat yang menjanjikan dalam pengembangan vaksin malaria tahap darah
karena tingkat konservasi dan imunogenisitasnya yang tinggi. Penelitian ini bertujuan untuk
mengekspresikan gen pengkode protein PfEBA-175 RIII-V pada Escherichia coli. Tahapan
penelitian yang dilakukan meliputi, (i) amplifikasi gen PfEBA-175 RIII-V menggunakan
cetakan DNA genom (gDNA) P. falciparum isolat Jayapura, (ii) konstruksi plasmid
rekombinan pET-16b-PfEBA-175-RIII-V, (iii) transformasi E. coli galur BL21 (DE3), BL21
Codon Plus (DE3) RIPL, BL21 (DE3) pLysS, dan Arctic Express (DE3) dengan plasmid
rekombinan pET-16b-PfEBA-175-RIII-V, dan (iv) ekspresi gen PfEBA-175 RIII-V. Hasil
analisis restriksi menggunakan enzim restriksi XhoI dan BamHI serta penentuan urutan
nukleotida menunjukkan bahwa plasmid rekombinan pET-16b-PfEBA-175-RIII-V berhasil
dikonstruksi. Protein rekombinan PfEBA-175 RIII-V diperkirakan memiliki berat molekul
sebesar 57,94 kDa, dimana pada N terminalnya terdapat 10XHis-Tag. Ekspresi PfEBA-175
RIII-V pada E. coli BL21 (DE3), E. coli BL21 Codon Plus (DE3) RIPL, dan E. coli BL21
(DE3) pLysS dilakukan dengan kondisi induksi IPTG 0,5 mM di 37? selama 4 jam dan
ekspresi PfEBA-175 RIII-V pada E. coli Arctic Express (DE3) dilakukan dengan kondisi
induksi IPTG 0,5 mM di 10? selama 18 jam. Analisis SDS-PAGE terhadap hasil ekspresi
pada keempat galur E. coli tersebut menunjukkan bahwa PfEBA-175 RIII-V tidak berhasil
diekspresikan. Hal ini diperkuat dengan analisis protein menggunakan western blot dengan
antibodi anti-HisTag yang tidak menunjukkan adanya fragmen protein dengan berat molekul
57,94 kDa. Kegagalan ekspresi PfEBA-175 RIII-V dapat disebabkan karena 23,6% asam
amino penyusun protein PfEBA-175 RIII-V dikodekan oleh kodon langka. Analisis kodon
langka gen PfEBA-175 RIII-V menunjukkan bahwa perlu dilakukan optimasi kodon untuk
tujuan ekspresi di inang E. coli karena gen tersebut memiliki nilai rendah pada sebagian besar
parameter preferensi kodon. Dengan demikian, penelitian ini menyarankan bahwa ekspresi
gen PfEBA-175 RIII-V dapat dilakukan menggunakan kodon yang telah dioptimasi untuk sel
inang E. coli.