Perpustakaan Digital ITB

Tanaman biasanya menggunakan pati sebagai sumber karbon dan energi. Biji, akar, umbi, dan kacang-kacangan adalah sumber pati yang paling umum. Hidrolisis enzimatis pati dapat dilakukan dengan bantuan -amilase. Bacillus megatrium NL3 dari Danau Kakaban di Indonesia menghasilkan produksi - amilase BmaN2 yang termasuk dalam famili GH13. BmaN2 dapat menghidrolisis pati menjadi oligosakarida linier dan bercabang. Studi in silico BmaN2 mengungkapkan bahwa Tyr101, His141, dan Trp179 diperkirakan berperan sebagai SBS (Surface Binding Substrate). Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui peran residu W179 dalam pengikatan substrat. Oleh karena itu, untuk mengetahui peran W179, dua varian BmaN2 yang ditetapkan sebagai BmaN2 W179F dan BmaN2 W179A dibangkitkan melalui mutasi TGG menjadi TTC untuk menghasilkan BmaN2 W179F dan TGG menjadi GCT untuk menghasilkan BmaN2 W179A. Mutagenesis terarah situs dilakukan dengan PCR menggunakan templat plasmid rekombinan pET30a-bmaN2 yang membawa gen BmaN2. Ekspresi BmaN2 WT, BmaN2 W179F, dan BmaN2 W179A pada Escherichia coli BL21(DE3) diinduksi dengan penambahan 0,1 mM IPTG pada suhu 25 C selama 4 jam. Analisis SDS-PAGE menunjukkan adanya protein dengan massa molekul 61,5 kDa. Aktivitas spesifik untuk BmaN2 WT, BmaN2 W179F, dan BmaN2 W179A masing-masing adalah 1,612 U/mg, 1,431 U/mg, dan 0,6842 U/mg. Hasil ini menunjukkan bahwa W179 dari BmaN2 memiliki peran penting dalam pengikatan substrat.